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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的基因的导入
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by sunxin2012 at 2012-12-19 19:12:37
只是完整的表达框就可以了吧？会不会有什么不好的影响。。。。。。。谢谢您了...

不知道你你做的是不是通过同源重组。除了表达基因所需的启动子、基因、终止子以外，还需要发生重组的那些元件。此外，不明白你指什么不好的影响。
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11楼2012-12-20 08:35:14
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 08:35:14
不知道你你做的是不是通过同源重组。除了表达基因所需的启动子、基因、终止子以外，还需要发生重组的那些元件。此外，不明白你指什么不好的影响。...

我做的只是将外源基因导入细胞，然后观察它所引起的功能和蛋白质的变化。。。。。。不好的影响是指目的基因会不会很容易断裂、丢失。
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Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
12楼2012-12-20 09:02:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by sunxin2012 at 2012-12-20 09:02:48
我做的只是将外源基因导入细胞，然后观察它所引起的功能和蛋白质的变化。。。。。。不好的影响是指目的基因会不会很容易断裂、丢失。...

如果想让外源基因稳定，最好整合到染色体上。质粒上必需有筛选压力才会存在，而且由于质粒的拷贝数不是很恒定，表达量也不稳定。如果整合到染色体上的话，应该是相对稳定的。整合后应该不容易断裂丢失。
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sunxin2012
13楼2012-12-20 09:06:56
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 09:06:56
如果想让外源基因稳定，最好整合到染色体上。质粒上必需有筛选压力才会存在，而且由于质粒的拷贝数不是很恒定，表达量也不稳定。如果整合到染色体上的话，应该是相对稳定的。整合后应该不容易断裂丢失。...

谢谢啊
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14楼2012-12-21 08:43:52
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你通过什么方法导入受体细胞，如果通过电子轰击的话只需要启动子加你的目的片段以及筛选标记基因片段就可以啦！
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15楼2012-12-21 11:53:41
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by platanus at 2012-12-21 11:53:41
看你通过什么方法导入受体细胞，如果通过电子轰击的话只需要启动子加你的目的片段以及筛选标记基因片段就可以啦！

谢谢哈
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16楼2012-12-22 19:34:48
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-20 09:06:56
如果想让外源基因稳定，最好整合到染色体上。质粒上必需有筛选压力才会存在，而且由于质粒的拷贝数不是很恒定，表达量也不稳定。如果整合到染色体上的话，应该是相对稳定的。整合后应该不容易断裂丢失。...

能不能再问你一问题，酶切后的末端不用做任何修饰吗？
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Saveyourheartforsomeonewhocares.把心留给在乎你的人吧。
17楼2012-12-23 09:49:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by sunxin2012 at 2012-12-23 09:49:58
能不能再问你一问题，酶切后的末端不用做任何修饰吗？...

你指要导入受体的酶切产物？最好把酶失活。
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18楼2012-12-23 10:24:45
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sunxin2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-23 10:24:45
你指要导入受体的酶切产物？最好把酶失活。...

奥，直接高温失活行么？
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19楼2012-12-23 11:37:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by sunxin2012 at 2012-12-23 11:37:04
奥，直接高温失活行么？...

多数限制性内切酶可以用高温失活。少数不行的最好纯化失活。
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20楼2012-12-23 11:47:03
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