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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hwchen2000 at 2012-12-25 10:06:30
谢谢你的帮助！
1.RNA最大的时候曾经用过2ug的量
2.我用的酶是Taq+pfu，因为是特定木本植物，所以找不到内参可以做
3.我的PCR体系一直用的20ul体系
现在最头疼的是温度从48-63℃都能出现弥散的非特异性扩增
没 ...

是的，因为做RT-PCR的步骤比较多，很难找到原因，但是重要的无非是RNA的完整性和纯度；RT体系尤其是逆转录酶；PCR扩增体系，如果引物可以的话，我觉得问题最大的就是酶的问题，退火温度太低虽然能引起非特异性，但是只要有目的条带也是可以的啊。我用的RNA提取试剂是TaKaRa的，RT试剂盒是Bio-rda的。觉得用的还可以。
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11楼2012-12-25 12:11:43
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