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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

[求助] 最近做WB实验,膜总是很花

最近在做WB实验,可是最后显影发现整张膜总是花花的,好像蛋白跑得到处都是,但是目的条带也出现了。是不是洗膜不够彻底,可是之前做都是很好的实验结果,最近一直重复不出来,很郁闷……

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尽自己最大的努力,优秀毕业!
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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by lidong.0107 at 2012-12-19 10:37:39
我也遇到过这样的情况,有两种原因,一是封闭后和敷完抗体后没有洗干净,二是显影是显影液加多了!wb不能着急,慢慢做,越急越不出结果。加油!

真的是,现在一抗孵育后我都会洗5-6次,然后显影液也减少了,已经没有出现这样的情况了。很纳闷的是,要是显影液加多了,没有蛋白的地方也是黑黑的。太谢谢你了……
尽自己最大的努力,优秀毕业!
12楼2012-12-20 13:39:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
乖乖宝贝: 金币+5, 谢谢回复 2012-12-16 10:36:37
这个一抗以前做过吗?感觉像是二抗过量了。
2楼2012-12-16 01:04:38
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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-16 01:04:38
这个一抗以前做过吗?感觉像是二抗过量了。

做过的,条件一摸一样,是内参!之前条件都摸清楚了。但是最近做WB,不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下,我用碧云天的封闭液封闭后,我还是用TBST洗3次,才孵育的。是不是不该洗?
尽自己最大的努力,优秀毕业!
3楼2012-12-16 10:38:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2012-12-16 10:38:52
做过的,条件一摸一样,是内参!之前条件都摸清楚了。但是最近做WB,不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下,我用碧云天的封闭液封闭后,我还是用TBST洗3次,才孵育的。是不是不该洗?...

如果一抗以前做过的,可能是二抗的问题,你可以借别的实验室的二抗试试。封闭后一般洗两次就够了,有人这一步不洗。关键洗膜是在一抗孵育后和二抗孵育后,如果洗不干净可能会造成高背景。
4楼2012-12-16 11:26:50
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