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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

[求助] 最近做WB实验,膜总是很花

最近在做WB实验,可是最后显影发现整张膜总是花花的,好像蛋白跑得到处都是,但是目的条带也出现了。是不是洗膜不够彻底,可是之前做都是很好的实验结果,最近一直重复不出来,很郁闷……

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尽自己最大的努力,优秀毕业!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2012-12-16 10:38:52
做过的,条件一摸一样,是内参!之前条件都摸清楚了。但是最近做WB,不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下,我用碧云天的封闭液封闭后,我还是用TBST洗3次,才孵育的。是不是不该洗?...

如果一抗以前做过的,可能是二抗的问题,你可以借别的实验室的二抗试试。封闭后一般洗两次就够了,有人这一步不洗。关键洗膜是在一抗孵育后和二抗孵育后,如果洗不干净可能会造成高背景。
4楼2012-12-16 11:26:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
乖乖宝贝: 金币+5, 谢谢回复 2012-12-16 10:36:37
这个一抗以前做过吗?感觉像是二抗过量了。
2楼2012-12-16 01:04:38
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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-16 01:04:38
这个一抗以前做过吗?感觉像是二抗过量了。

做过的,条件一摸一样,是内参!之前条件都摸清楚了。但是最近做WB,不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下,我用碧云天的封闭液封闭后,我还是用TBST洗3次,才孵育的。是不是不该洗?
尽自己最大的努力,优秀毕业!
3楼2012-12-16 10:38:52
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
乖乖宝贝: 金币+3, 有帮助, 谢谢回复哦…… 2012-12-16 15:33:55
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-12-16 22:36:01
个人觉得是封闭不好,封闭时候一定摇的均匀。
洗三次应该是没什么问题。如果是没洗好,为什么有的地方很干净有的地方高背景呢。
建议封闭这一步楼主多思考下。
5楼2012-12-16 12:57:17
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