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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

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[求助] 最近做WB实验，膜总是很花

最近在做WB实验，可是最后显影发现整张膜总是花花的，好像蛋白跑得到处都是，但是目的条带也出现了。是不是洗膜不够彻底，可是之前做都是很好的实验结果，最近一直重复不出来，很郁闷……

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尽自己最大的努力，优秀毕业！

1楼 2012-12-16 00:30:24

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

引用回帖:

3楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2012-12-16 10:38:52
做过的，条件一摸一样，是内参！之前条件都摸清楚了。但是最近做WB，不管什么条件最终显影膜都是这样花花的。随便说一下，我用碧云天的封闭液封闭后，我还是用TBST洗3次，才孵育的。是不是不该洗？...

如果一抗以前做过的，可能是二抗的问题，你可以借别的实验室的二抗试试。封闭后一般洗两次就够了，有人这一步不洗。关键洗膜是在一抗孵育后和二抗孵育后，如果洗不干净可能会造成高背景。