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xjx722

木虫 (小有名气)

[求助] 配制percoll分层的问题--分离肝窦内皮细胞 已有1人参与

请教各位,我们在配制Percoll离心介质的过程中,25%的percoll和50%的直接混在一起了,无法形成分层,这是怎么回事?请指教。我们的做法是:

SPS 50ml配制(使用前配置):10×PBS 5ml,Percoll原液45ml,pH 7.4,4℃冰箱保存;
50%Percoll液15ml配制(使用时配制):7.5ml SPS,7.5ml 1×PBS;
25%Percoll液20ml配制(使用时配制):5ml SPS,15ml 1×PBS。
10×PBS(100ml):NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HP04.12H20 2.9g,KH2P04 0.2g,过滤除菌,4℃保存。

50ml尖底透亮离心管倾斜,用5ml枪头沿管壁缓慢依次加入体积分数为50%的Percoll 15ml,体积分数为25%的Percoll 20ml,10ml非实质细胞悬液。
谢谢了!
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崇高而孤独的事业!
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zhouwang

禁虫 (初入文坛)

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4楼2015-06-22 00:00:29
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xjx722

木虫 (小有名气)

肿么没人回答啊!各位帮帮忙!
崇高而孤独的事业!
2楼2012-12-17 14:06:27
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dreamerace

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你这个问题解决了么?
我也做这个,跟离心机有关,要用水平离心机,还有你加入25%的percoll的时候要沿着壁小心混层

请问你这个实验已经做完了么?结果怎么样啊?
学无止境
3楼2014-06-23 15:35:26
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