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happydd点点

铜虫 (小有名气)

[求助] 石蜡切片步骤

求助石蜡切片步骤，急，十分感谢
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1楼 2012-12-14 18:22:41
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八趣晓伟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
石蜡切片试验过程（全部试剂以无水乙醇为溶剂）
50%乙醇   2小时
70%乙醇   2小时
80%乙醇   2小时
85%乙醇   2小时
90%乙醇   2小时
95%的番红   2小时
纯乙醇  1小时
纯乙醇  1小时
50%  二甲苯   2.5-3小时
纯二甲苯   2.5-3小时
纯二甲苯   2.5-3小时
第一次碎蜡    1小时
第二次碎蜡    1小时
第三次碎蜡    1小时
第四次碎蜡    1小时
纯蜡          1小时
纯蜡          1小时
制蜡块
切片
脱蜡
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2楼2012-12-14 19:49:31
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happydd点点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 八趣晓伟 at 2012-12-14 19:49:31
石蜡切片试验过程（全部试剂以无水乙醇为溶剂）
50%乙醇   2小时
70%乙醇   2小时
80%乙醇   2小时
85%乙醇   2小时
90%乙醇   2小时
95%的番红   2小时
纯乙醇  1小时
纯乙醇  1小时
50%  二甲苯   2.5-3 ...

非常感谢，请问，你二甲苯的时间是2.5-3h是不是太长了？
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3楼2012-12-14 20:22:57
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八趣晓伟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by happydd点点 at 2012-12-14 20:22:57
非常感谢，请问，你二甲苯的时间是2.5-3h是不是太长了？...

二甲苯主要是使组织透明彻底。若透明时间不足，则石蜡进不去，进蜡效果不好，影响切片；但透明时间过长，组织收缩变脆、变硬，切片易碎，也影响切片。我做植物组织，一般都是浸泡2个多小时。最后做出来的效果不错。你可以先少做几个预实验看看效果（虽然很费时间很费精力），大致把握一下浸泡时间。。。。
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4楼2012-12-15 14:31:02
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八趣晓伟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by happydd点点 at 2012-12-14 20:22:57
非常感谢，请问，你二甲苯的时间是2.5-3h是不是太长了？...

二甲苯主要是使组织透明彻底。若透明时间不足，则石蜡进不去，进蜡效果不好，影响切片；但透明时间过长，组织收缩变脆、变硬，切片易碎，也影响切片。我做植物组织，一般都是浸泡2个多小时。最后做出来的效果不错。你可以先少做几个预实验看看效果（虽然很费时间很费精力），大致把握一下浸泡时间。。。。
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5楼2012-12-15 14:31:14
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happydd点点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 八趣晓伟 at 2012-12-15 14:31:02
二甲苯主要是使组织透明彻底。若透明时间不足，则石蜡进不去，进蜡效果不好，影响切片；但透明时间过长，组织收缩变脆、变硬，切片易碎，也影响切片。我做植物组织，一般都是浸泡2个多小时。最后做出来的效果不错。 ...

我做了几次，但是每次切片的时候都是碎的，连不成片。。。我的是3/4酒精+1/4二甲苯，1h；1/2+1/2，1h，1/4酒精+3/4二甲苯，1h；纯二甲苯，30min，再纯二甲苯，30min
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6楼2012-12-15 22:14:56
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八趣晓伟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by happydd点点 at 2012-12-15 22:14:56
我做了几次，但是每次切片的时候都是碎的，连不成片。。。我的是3/4酒精+1/4二甲苯，1h；1/2+1/2，1h，1/4酒精+3/4二甲苯，1h；纯二甲苯，30min，再纯二甲苯，30min...

你们实验室往年是怎么做的，你可以按照师兄师姐的方法试一下；如果你试验时间还很充足你不妨用一下我的时间以及试剂配比方法，虽然时间长，但是我们实验室做出来的效果真的不错。你或者看看你融蜡时的温度或者进蜡量是不是有问题，你最好找师兄师姐或者导师请教一下，否则你只能一直徒劳。
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7楼2012-12-16 12:14:40
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happydd点点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 八趣晓伟 at 2012-12-16 12:14:40
你们实验室往年是怎么做的，你可以按照师兄师姐的方法试一下；如果你试验时间还很充足你不妨用一下我的时间以及试剂配比方法，虽然时间长，但是我们实验室做出来的效果真的不错。你或者看看你融蜡时的温度或者进蜡 ...

谢谢。我们的切片刀坏了，换了就好多了。但是显微镜下观察根横切面结构，发现组织破裂了。做了几次都这样。不知道怎么了。
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8楼2013-02-26 09:07:57
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