应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆基因，挑克隆拿去测序，好多点突怎么办！？
222/3返回列表上一页123下一页
查看: 2743  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-14 12:29:55
NCBI有个SNP数据库，你可以到那里面去查一下看看...

噢噢，好的~我看看~多谢
赞一下 回复此楼
对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
11楼2012-12-14 13:24:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengdeqiao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
伤何处: 金币+1, ★有帮助, 谢谢~我看了的，没读错。。郁闷 2012-12-26 18:47:21
请楼主仔细核对一下公司提供的测序图谱，有可能是读错了，很多是机器读的，出错难免。一般来说，即使用最普通的taq酶，突变也不会很多。
赞一下 回复此楼
12楼2012-12-14 15:10:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
13楼2012-12-14 15:28:11
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-13 23:11:15
是的，从cDNA里面扩增的，还是用ExTaq比较好，既然有突变，那就能这样了，接下来，你可以将不同克隆之间没有突变的部分拼接起来，酶切的方法，overlap的方法，还有你要查清楚，你所讲的突变，发生率是否高，是不是 ...

这个修正回来的难度可是很大。
赞一下 回复此楼
14楼2012-12-14 17:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-14 17:15:39
这个修正回来的难度可是很大。...

你的序列有多长，你克隆在什么载体上的，我以前经常这么做来修正基因
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
15楼2012-12-14 21:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-14 21:04:53
你的序列有多长，你克隆在什么载体上的，我以前经常这么做来修正基因...

一般基因1000-2000吧，克隆在T vector上，总共在5k左右。
如果用点突变纠正的方法，需要合成引物吧？
要是有2-3个点突变的话，就挺麻烦的。

如果您有什么好方法，还请赐教。
谢谢！
赞一下 回复此楼
16楼2012-12-15 09:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
伤何处: 金币+2, ★有帮助, 谢谢啊~ 请问这种酶价格多少，贵不贵？ 2012-12-15 21:41:02
我们大于1000的片段都是用NEB的Q5来P，至今没遇到过突变~~
赞一下 回复此楼
17楼2012-12-15 17:16:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
伤何处: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢~我已经订了，用着试试看~ 2012-12-17 14:38:11
50ul的体系加0.5ul的Q5，用一次大概2.5元~~
赞一下 回复此楼
18楼2012-12-16 16:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 李小同 at 2012-12-16 16:18:43
50ul的体系加0.5ul的Q5，用一次大概2.5元~~

Q5酶送到了，请问你们一般循环数是多少？从基因组DNA 克隆基因
赞一下 回复此楼
对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
19楼2012-12-29 20:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 伤何处 at 2012-12-29 20:17:05
Q5酶送到了，请问你们一般循环数是多少？从基因组DNA 克隆基因...

一般是30个循环，这个你可以自己尝试一下
赞一下 回复此楼
20楼2012-12-30 15:58:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 伤何处 的主题更新
222/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 10:18 by winsaint
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +13 晴天加油 2026-08-26 14/700 2026-08-28 18:36 by huagongfeihu
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭