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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆基因，挑克隆拿去测序，好多点突怎么办！？
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伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-14 12:29:55
NCBI有个SNP数据库，你可以到那里面去查一下看看...

噢噢，好的~我看看~多谢
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
11楼2012-12-14 13:24:46
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shengdeqiao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
伤何处: 金币+1, ★有帮助, 谢谢~我看了的，没读错。。郁闷 2012-12-26 18:47:21
请楼主仔细核对一下公司提供的测序图谱，有可能是读错了，很多是机器读的，出错难免。一般来说，即使用最普通的taq酶，突变也不会很多。
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12楼2012-12-14 15:10:38
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匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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13楼2012-12-14 15:28:11
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wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-13 23:11:15
是的，从cDNA里面扩增的，还是用ExTaq比较好，既然有突变，那就能这样了，接下来，你可以将不同克隆之间没有突变的部分拼接起来，酶切的方法，overlap的方法，还有你要查清楚，你所讲的突变，发生率是否高，是不是 ...

这个修正回来的难度可是很大。
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14楼2012-12-14 17:15:39
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-14 17:15:39
这个修正回来的难度可是很大。...

你的序列有多长，你克隆在什么载体上的，我以前经常这么做来修正基因
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
15楼2012-12-14 21:04:53
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wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-14 21:04:53
你的序列有多长，你克隆在什么载体上的，我以前经常这么做来修正基因...

一般基因1000-2000吧，克隆在T vector上，总共在5k左右。
如果用点突变纠正的方法，需要合成引物吧？
要是有2-3个点突变的话，就挺麻烦的。

如果您有什么好方法，还请赐教。
谢谢！
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16楼2012-12-15 09:59:44
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
伤何处: 金币+2, ★有帮助, 谢谢啊~ 请问这种酶价格多少，贵不贵？ 2012-12-15 21:41:02
我们大于1000的片段都是用NEB的Q5来P，至今没遇到过突变~~
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17楼2012-12-15 17:16:14
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
伤何处: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢~我已经订了，用着试试看~ 2012-12-17 14:38:11
50ul的体系加0.5ul的Q5，用一次大概2.5元~~
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18楼2012-12-16 16:18:43
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伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 李小同 at 2012-12-16 16:18:43
50ul的体系加0.5ul的Q5，用一次大概2.5元~~

Q5酶送到了，请问你们一般循环数是多少？从基因组DNA 克隆基因
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
19楼2012-12-29 20:17:05
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 伤何处 at 2012-12-29 20:17:05
Q5酶送到了，请问你们一般循环数是多少？从基因组DNA 克隆基因...

一般是30个循环，这个你可以自己尝试一下
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20楼2012-12-30 15:58:14
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