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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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伤何处

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-14 12:29:55
NCBI有个SNP数据库,你可以到那里面去查一下看看...

噢噢,好的~我看看~多谢
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
11楼2012-12-14 13:24:46
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shengdeqiao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
伤何处: 金币+1, 有帮助, 谢谢~我看了的,没读错。。郁闷 2012-12-26 18:47:21
请楼主仔细核对一下公司提供的测序图谱,有可能是读错了,很多是机器读的,出错难免。一般来说,即使用最普通的taq酶,突变也不会很多。
12楼2012-12-14 15:10:38
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匿名

用户注销 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖仅楼主可见
13楼2012-12-14 15:28:11
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-13 23:11:15
是的,从cDNA里面扩增的,还是用ExTaq比较好,既然有突变,那就能这样了,接下来,你可以将不同克隆之间没有突变的部分拼接起来,酶切的方法,overlap的方法,还有你要查清楚,你所讲的突变,发生率是否高,是不是 ...

这个修正回来的难度可是很大。
14楼2012-12-14 17:15:39
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-14 17:15:39
这个修正回来的难度可是很大。...

你的序列有多长,你克隆在什么载体上的,我以前经常这么做来修正基因
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
15楼2012-12-14 21:04:53
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-14 21:04:53
你的序列有多长,你克隆在什么载体上的,我以前经常这么做来修正基因...

一般基因1000-2000吧,克隆在T vector上,总共在5k左右。
如果用点突变纠正的方法,需要合成引物吧?
要是有2-3个点突变的话,就挺麻烦的。

如果您有什么好方法,还请赐教。
谢谢!
16楼2012-12-15 09:59:44
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
伤何处: 金币+2, 有帮助, 谢谢啊~ 请问这种酶价格多少,贵不贵? 2012-12-15 21:41:02
我们大于1000的片段都是用NEB的Q5来P,至今没遇到过突变~~
17楼2012-12-15 17:16:14
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
伤何处: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢~我已经订了,用着试试看~ 2012-12-17 14:38:11
50ul的体系加0.5ul的Q5,用一次大概2.5元~~
18楼2012-12-16 16:18:43
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伤何处

木虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 李小同 at 2012-12-16 16:18:43
50ul的体系加0.5ul的Q5,用一次大概2.5元~~

Q5酶送到了,请问你们一般循环数是多少?从基因组DNA 克隆基因
对也罢,错也罢;正也罢,逆也罢;通途也好,崎岖无妨……但问,吾心坚否?若坚,纵使歧路,以铁心,贯穿而过,亦为大道!不坚,便是坦途,也难登临绝顶,观险峰
19楼2012-12-29 20:17:05
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李小同

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by 伤何处 at 2012-12-29 20:17:05
Q5酶送到了,请问你们一般循环数是多少?从基因组DNA 克隆基因...

一般是30个循环,这个你可以自己尝试一下
20楼2012-12-30 15:58:14
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