应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒pcr
231/3返回列表123下一页
查看: 1316  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒pcr

我提取到了质粒50ul，但是一做单酶切和双酶切实验鉴定的话就会用去很多，可能最后用来用载体连接的时候就没剩余多少了，而且我还想把质粒拿去测序一下。所以我想问一下，能不能直接对质粒进行pcr实验，如果可以的话，我就能大量获得质粒，不用来回的涂平板摇菌，再回收和再酶切鉴定了。请问诸位有尝试过这种实验的么，麻烦给点指导吧。不胜感激。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生物学

» 猜你喜欢
有今生没来世，且行且珍惜。
1楼 2012-12-13 12:37:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shsDerek

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化Top10，再提质粒就可以获得大量质粒
赞一下 回复此楼
2楼2012-12-13 12:39:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你质粒的大小，而且这样获得的质粒有发生点突变的危险，而胞内由于修复系统，几乎不会有突变。酶切后质粒丢失，可能是你回收的方法或试剂盒不好，建议考虑换个试剂盒。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2012-12-13 12:47:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是刚刚知道可以直接用质粒pcr，而且这个只是一个大概的范围，老板建议直接测序

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
4楼2012-12-13 13:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR总是会有错配的风险吧，如果不对了可能直接影响后面是克隆。如果不够再提一下也不麻烦。再说，经鉴定正确的质粒是从单克隆提出来的吧，直接把那个编号的克隆再摇一下提质粒就可以了，为什么还要来回铺板、摇菌、鉴定呀？
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-13 14:53:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提质粒很麻烦吗，直接搞一次大提，够你用N次了，PCR扩增质粒很难扩增到单一的质粒的，而且还会突变，提质粒是最简单的
赞一下 回复此楼
6楼2012-12-13 17:25:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切的话，不用太多，一个反应2-3uL。
需要的多，可以回转大肠杆菌，再提质粒，要多少有多少。
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-13 21:54:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shsDerek at 2012-12-13 12:39:40
转化Top10，再提质粒就可以获得大量质粒

我转化到DH5a里面去了、、、
赞一下 回复此楼
有今生没来世，且行且珍惜。
8楼2012-12-14 16:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-13 12:47:06
看你质粒的大小，而且这样获得的质粒有发生点突变的危险，而胞内由于修复系统，几乎不会有突变。酶切后质粒丢失，可能是你回收的方法或试剂盒不好，建议考虑换个试剂盒。
...

质粒pcr结果得到的还是质粒吗？怎么推断都感觉得到是目的片段呢。。。
赞一下 回复此楼
有今生没来世，且行且珍惜。
9楼2012-12-14 16:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-12-13 13:19:52
我也是刚刚知道可以直接用质粒pcr，而且这个只是一个大概的范围，老板建议直接测序

我现在把质粒送测序了，但愿能测出结果。
赞一下 回复此楼
有今生没来世，且行且珍惜。
10楼2012-12-14 16:34:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Cllair 的主题更新
231/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +7 苏东坡二世 2026-08-23 7/350 2026-08-27 18:14 by 瞬息宇宙
[基金申请] 青基如何破局 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 17:25 by xxniao123
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +10 晴天加油 2026-08-26 11/550 2026-08-27 16:35 by msuhlx
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +7 Kittylucky 2026-08-27 7/350 2026-08-27 16:31 by msuhlx
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 面上合作单位盖章 +3 ssyjh 2026-08-27 3/150 2026-08-27 09:59 by 阿拉贡aragon
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 17/850 2026-08-27 08:20 by 大萍1987
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭