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Cllair

金虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-13 14:53:51
PCR总是会有错配的风险吧,如果不对了可能直接影响后面是克隆。如果不够再提一下也不麻烦。再说,经鉴定正确的质粒是从单克隆提出来的吧,直接把那个编号的克隆再摇一下提质粒就可以了,为什么还要来回铺板、摇菌、 ...

平板上的菌不是长十几个小时以后摇菌最好吗?时间久了再摇的话效果还好吗?
有今生没来世,且行且珍惜。
11楼2012-12-14 16:36:16
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Cllair

金虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by huoyongting at 2012-12-13 17:25:07
提质粒很麻烦吗,直接搞一次大提,够你用N次了,PCR扩增质粒很难扩增到单一的质粒的,而且还会突变,提质粒是最简单的

那么 我整一次大提取好了,\(^o^)/~谢谢
有今生没来世,且行且珍惜。
12楼2012-12-14 16:36:49
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Cllair

金虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-13 21:54:45
酶切的话,不用太多,一个反应2-3uL。
需要的多,可以回转大肠杆菌,再提质粒,要多少有多少。

转化后的大肠杆菌如果在平板上长的时间比较久的话,比如一周左右,在摇菌的话,提取效果还好吗?
有今生没来世,且行且珍惜。
13楼2012-12-14 16:40:20
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引用回帖:
10楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:34:45
我现在把质粒送测序了,但愿能测出结果。...

祝福啊
14楼2012-12-14 16:47:31
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:40:20
转化后的大肠杆菌如果在平板上长的时间比较久的话,比如一周左右,在摇菌的话,提取效果还好吗?...

如果是在4度的话,挑取克隆摇菌,应该没有问题。
15楼2012-12-14 17:14:33
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Cllair

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-12-14 16:47:31
祝福啊...

谢谢
有今生没来世,且行且珍惜。
16楼2012-12-14 18:59:42
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Cllair

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-14 17:14:33
如果是在4度的话,挑取克隆摇菌,应该没有问题。...

是在37度呢。。。。
有今生没来世,且行且珍惜。
17楼2012-12-14 19:00:54
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:32:11
质粒pcr结果得到的还是质粒吗?怎么推断都感觉得到是目的片段呢。。。...

是线性的,做点突变就是要扩增整个质粒载体。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
18楼2012-12-14 19:08:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:36:16
平板上的菌不是长十几个小时以后摇菌最好吗?时间久了再摇的话效果还好吗?...

平板可以保存三个月没问题,不过两个月后再挑克隆摇菌就不是很理想了。时间长了最好是划线后再挑菌。话说回来,你鉴定正确之后不是应该把该克隆再次划线,并且做甘油stock冻存的吗?
19楼2012-12-15 07:18:24
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 19:00:54
是在37度呢。。。。...

37度,一星期就干了。菌长成一团,也挑不到单克隆。不建议这么做。
20楼2012-12-15 10:01:43
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