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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒pcr
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Cllair

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-13 14:53:51
PCR总是会有错配的风险吧，如果不对了可能直接影响后面是克隆。如果不够再提一下也不麻烦。再说，经鉴定正确的质粒是从单克隆提出来的吧，直接把那个编号的克隆再摇一下提质粒就可以了，为什么还要来回铺板、摇菌、 ...

平板上的菌不是长十几个小时以后摇菌最好吗？时间久了再摇的话效果还好吗？
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有今生没来世，且行且珍惜。
11楼2012-12-14 16:36:16
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huoyongting at 2012-12-13 17:25:07
提质粒很麻烦吗，直接搞一次大提，够你用N次了，PCR扩增质粒很难扩增到单一的质粒的，而且还会突变，提质粒是最简单的

那么 我整一次大提取好了，\(^o^)/~谢谢
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12楼2012-12-14 16:36:49
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Cllair

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-13 21:54:45
酶切的话，不用太多，一个反应2-3uL。
需要的多，可以回转大肠杆菌，再提质粒，要多少有多少。

转化后的大肠杆菌如果在平板上长的时间比较久的话，比如一周左右，在摇菌的话，提取效果还好吗？
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13楼2012-12-14 16:40:20
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静安jingan
引用回帖:
10楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:34:45
我现在把质粒送测序了，但愿能测出结果。...

祝福啊
14楼2012-12-14 16:47:31
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:40:20
转化后的大肠杆菌如果在平板上长的时间比较久的话，比如一周左右，在摇菌的话，提取效果还好吗？...

如果是在4度的话，挑取克隆摇菌，应该没有问题。
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15楼2012-12-14 17:14:33
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-12-14 16:47:31
祝福啊...

谢谢
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16楼2012-12-14 18:59:42
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by wangpeng227 at 2012-12-14 17:14:33
如果是在4度的话，挑取克隆摇菌，应该没有问题。...

是在37度呢。。。。
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17楼2012-12-14 19:00:54
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:32:11
质粒pcr结果得到的还是质粒吗？怎么推断都感觉得到是目的片段呢。。。...

是线性的，做点突变就是要扩增整个质粒载体。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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18楼2012-12-14 19:08:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 16:36:16
平板上的菌不是长十几个小时以后摇菌最好吗？时间久了再摇的话效果还好吗？...

平板可以保存三个月没问题，不过两个月后再挑克隆摇菌就不是很理想了。时间长了最好是划线后再挑菌。话说回来，你鉴定正确之后不是应该把该克隆再次划线，并且做甘油stock冻存的吗？
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19楼2012-12-15 07:18:24
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wangpeng227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by Cllair at 2012-12-14 19:00:54
是在37度呢。。。。...

37度，一星期就干了。菌长成一团，也挑不到单克隆。不建议这么做。
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20楼2012-12-15 10:01:43
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