24小时热门版块排行榜    

查看: 4923  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

messi1910

铜虫 (初入文坛)

[求助] qPCR总出现非特异性扩增,到底是怎么回事?

1. 我提取了两个样品的RNA,然后反转录为cDNA;
2. 通过普通的PCR检测引物和cDNA情况,显示特异性很好,单带,如下图:
3. 我在qPCR的时候扩增曲线的重复性还是不错的,但是溶解曲线就不好了,总是有个小峰,就是所谓的非特异性扩增吧,几乎所有的靶标都是这样的,actin内参也是的,但这个内参,我原来用也可以啊,没这种情况;难道这是模板的问题,但我的普通PCR扩增的还挺好的啊;

请大家帮我分析下什么原因,和qPCR的设置我想没太大的关系吧。

普通PCR



溶解曲线



让我伤心的1
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stewart3261

铜虫 (小有名气)

你用的是什么扩增试剂盒,有时不见的是引物不好,试剂盒不好也会出现这种非特异性扩增的!
14楼2012-12-14 12:34:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
实在不行就,多设几对引物,然后挑出特异性最好的,普通的PCR只能看大概,它的结果不代表qPCR的
我们的过去,成就了如今的我们,无需悔恨
2楼2012-12-12 16:45:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
messi1910: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-13 08:53:09
可能是引物二聚体的关系,如果你担心小峰影响你的定量,从你这张图上来看,可以先在77度(即小峰和大峰之间的温度)hold 5s,然后再读荧光值
3楼2012-12-12 21:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

p53jun

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不如Taqman?或者商业SYBR Green 2x mix?
4楼2012-12-13 00:27:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:27 by 9i7PCSZyMzot
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:15 by 9i7PCSZyMzot
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:15 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 01:03 by 9i7PCSZyMzot
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 E4V9bALS54sj 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:51 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 3/150 2026-09-20 00:15 by 9i7PCSZyMzot
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-20 00:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:51 by 9i7PCSZyMzot
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:39 by 9i7PCSZyMzot
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:27 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-19 4/200 2026-09-19 23:03 by 9i7PCSZyMzot
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 4pRyVGCVerAA 2026-09-18 7/350 2026-09-19 21:03 by 9i7PCSZyMzot
[教师之家] 现代”学阀”该如何界定 +3 iaeyuan 2026-09-19 3/150 2026-09-19 20:52 by 没昵称呀
[基金申请] 国社科系统bug了,是不是要放榜了? +7 kynobel 2026-09-16 9/450 2026-09-19 14:52 by 接好运婷
[考博] 申博发邮件 +8 Lmengk 2026-09-15 9/450 2026-09-19 09:27 by 中间体超市
[有机交流] 各位大神,目前国内有哪些比较好用的逆合成软件? 20+3 zapen 2026-09-15 9/450 2026-09-18 18:17 by zapen
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组|2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
信息提示
请填处理意见