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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » LPS诱导BV2 细胞 NO检测 不出结果 求指导
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yjkang6587

银虫 (小有名气)

[求助] LPS诱导BV2 细胞 NO检测 不出结果 求指导 已有1人参与

最近在做LPS诱导BV2细胞活化，检测NO，结果发现加LPS组的NO弄度和对照组基本一样，求各位高手给指点迷津。
实验步骤如下：
   1.BV2细胞（购自于中科院昆明动物研究所细胞库，编号KCB200770YJ），细胞种在24孔板中，细胞密度是10万个/ml,每个孔里种500微升，培养24h。
  2.细胞用PBS洗3次，加入含有LPS的无血清1640培养基，使LPS的终浓度为1微克每毫升，培养24h。
3.取细胞培养上清液50微升，加入等体积的Griess 1和Griess2 试剂，540nm检测吸光度。（NO检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所）
脂多糖LPS购自Sigma O111：B4 产品编号L2630。LPS溶于PBS溶液中，配成100微克/ml， 分装在EP管中，每管1ml于-20度保存。
这个实验我重复了五次，NO检测值一直没有明显变化，求各位高人给指点一下，不胜感激
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1楼 2012-12-11 16:57:39
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)
我的也有响应值低的问题，而且重复性不好，响应值只能做到0.3左右。
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2楼2013-03-01 19:11:03
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yunpei-89 at 2013-03-01 19:11:03
我的也有响应值低的问题，而且重复性不好，响应值只能做到0.3左右。

想问一下你的响应值是多少，说不定可以互相帮助下，我用的是raw264.7细胞。
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3楼2013-03-01 19:12:06
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landa_sh

铜虫 (正式写手)
你好！我的实验也碰到类似的原因，你的解决了吗，请教！
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沿着正确的方向坚持
4楼2013-12-27 17:45:33
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maxwoo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可测细胞裂解液中的，此外应作lps梯度

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2013-12-28 22:59:36
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landa_sh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by maxwoo at 2013-12-28 22:59:36
可测细胞裂解液中的，此外应作lps梯度

你好，特此请教：
我们在做这个实验时也遇见这个问题，测不到NO。
但我们做的过程中未用到裂解液啊？

能否告诉纤细步骤？
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沿着正确的方向坚持
6楼2013-12-29 20:35:02
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maxwoo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by landa_sh at 2013-12-29 20:35:02
你好，特此请教：
我们在做这个实验时也遇见这个问题，测不到NO。
但我们做的过程中未用到裂解液啊？

能否告诉纤细步骤？...

碧云天网站说明书有详解

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2013-12-30 14:14:46
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landa_sh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by maxwoo at 2013-12-30 14:14:46
碧云天网站说明书有详解
...

非常感谢！
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沿着正确的方向坚持
8楼2014-01-01 11:49:47
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呵呵额额

银虫 (小有名气)
内容已删除
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9楼2015-12-10 15:29:51
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