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yjkang6587

银虫 (小有名气)

[求助] LPS诱导BV2 细胞 NO检测 不出结果 求指导 已有1人参与

最近在做LPS诱导BV2细胞活化,检测NO,结果发现加LPS组的NO弄度和对照组基本一样,求各位高手给指点迷津。
实验步骤如下:
   1.BV2细胞(购自于中科院昆明动物研究所细胞库,编号KCB200770YJ),细胞种在24孔板中,细胞密度是10万个/ml,每个孔里种500微升,培养24h。
  2.细胞用PBS洗3次,加入含有LPS的无血清1640培养基,使LPS的终浓度为1微克每毫升,培养24h。
3.取细胞培养上清液50微升,加入等体积的Griess 1和Griess2 试剂,540nm检测吸光度。(NO检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所)
脂多糖LPS购自Sigma O111:B4 产品编号L2630。LPS溶于PBS溶液中,配成100微克/ml, 分装在EP管中,每管1ml于-20度保存。
这个实验我重复了五次,NO检测值一直没有明显变化,求各位高人给指点一下,不胜感激
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)

我的也有响应值低的问题,而且重复性不好,响应值只能做到0.3左右。
2楼2013-03-01 19:11:03
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yunpei-89

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yunpei-89 at 2013-03-01 19:11:03
我的也有响应值低的问题,而且重复性不好,响应值只能做到0.3左右。

想问一下你的响应值是多少,说不定可以互相帮助下,我用的是raw264.7细胞。
3楼2013-03-01 19:12:06
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landa_sh

铜虫 (正式写手)

你好!我的实验也碰到类似的原因,你的解决了吗,请教!
沿着正确的方向坚持
4楼2013-12-27 17:45:33
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maxwoo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可测细胞裂解液中的,此外应作lps梯度

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2013-12-28 22:59:36
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landa_sh

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by maxwoo at 2013-12-28 22:59:36
可测细胞裂解液中的,此外应作lps梯度

你好,特此请教:
我们在做这个实验时也遇见这个问题,测不到NO。
但我们做的过程中未用到裂解液啊?

能否告诉纤细步骤?
沿着正确的方向坚持
6楼2013-12-29 20:35:02
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maxwoo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by landa_sh at 2013-12-29 20:35:02
你好,特此请教:
我们在做这个实验时也遇见这个问题,测不到NO。
但我们做的过程中未用到裂解液啊?

能否告诉纤细步骤?...

碧云天网站说明书有详解

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2013-12-30 14:14:46
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landa_sh

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by maxwoo at 2013-12-30 14:14:46
碧云天网站说明书有详解
...

非常感谢!
沿着正确的方向坚持
8楼2014-01-01 11:49:47
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呵呵额额

银虫 (小有名气)

内容已删除
9楼2015-12-10 15:29:51
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