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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » IPTG诱导表达的问题
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tete1987

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by karlgu18 at 2012-12-11 14:31:10
30个金币啊，可真真是不少的财物，见钱心喜了。
根据我多年IPTG诱导表达，主要是摇瓶的诱导表达经验(发酵罐我们不用IPTG了)来大致地阐述一下：
(1)质粒复制，蛋白诱导表达都是一个耗能的过程，会消耗宿主菌的ATP， ...

摇瓶体系中，大肠杆菌能完全承受IPTG诱导表达。
发酵罐中我采用跟摇瓶一样的诱导条件，但是导致生长缓慢，只能得到少量细胞。摇瓶诱导对发酵罐有多大的借鉴意义呢？
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嘿嘿，just for you~
11楼2013-03-07 21:29:35
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by karlgu18 at 2012-12-18 17:09:16
大肠杆菌诱导表达分成两个阶段：培养和诱导
(1) 培养
接种，30℃培养，待OD600nm=2-3，或者1-2时进行诱导。接种量千分之五。培养时间7-8h或者5-6h。
(2)诱导
30℃诱导，即下班前或者17点左右诱导。诱导是overn ...

我用IPTG诱导时终浓度是0.5mM，30℃诱导6h，在SDS蛋白电泳中，破碎沉淀中有目的蛋白条带，而且很亮，这是不是说明表达的蛋白是以包涵体的形式存在？如果是的话，该如何确定最佳的IPTG浓度呢？是从0.1-0.5mM依次做摇瓶，然后跑SDS吗？
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···
12楼2014-10-22 21:48:42
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匿名

用户注销 (正式写手)
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13楼2015-03-06 11:03:26
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