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tete1987

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by karlgu18 at 2012-12-11 14:31:10
30个金币啊,可真真是不少的财物,见钱心喜了。
根据我多年IPTG诱导表达,主要是摇瓶的诱导表达经验(发酵罐我们不用IPTG了)来大致地阐述一下:
(1)质粒复制,蛋白诱导表达都是一个耗能的过程,会消耗宿主菌的ATP, ...

摇瓶体系中,大肠杆菌能完全承受IPTG诱导表达。
发酵罐中我采用跟摇瓶一样的诱导条件,但是导致生长缓慢,只能得到少量细胞。摇瓶诱导对发酵罐有多大的借鉴意义呢?
嘿嘿,just for you~
11楼2013-03-07 21:29:35
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
8楼: Originally posted by karlgu18 at 2012-12-18 17:09:16
大肠杆菌诱导表达分成两个阶段:培养和诱导
(1) 培养
接种,30℃培养,待OD600nm=2-3,或者1-2时进行诱导。接种量千分之五。培养时间7-8h或者5-6h。
(2)诱导
30℃诱导,即下班前或者17点左右诱导。诱导是overn ...

我用IPTG诱导时终浓度是0.5mM,30℃诱导6h,在SDS蛋白电泳中,破碎沉淀中有目的蛋白条带,而且很亮,这是不是说明表达的蛋白是以包涵体的形式存在?如果是的话,该如何确定最佳的IPTG浓度呢?是从0.1-0.5mM依次做摇瓶,然后跑SDS吗?
···
12楼2014-10-22 21:48:42
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匿名

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13楼2015-03-06 11:03:26
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