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笑笑2697

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达

我截取催化活性部分的基因对其进行表达，为什么截取的小片段基因不表达呢？
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1楼 2012-12-10 08:26:48
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sdgxz

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以看一下08年nature上的这篇文章：Protein production and purification
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3楼2012-12-10 15:37:25
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也许是蛋白不稳定呢，表达但是降解了，太小的蛋白是不太稳定的，还有一个N端氨基酸规则。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2012-12-10 10:13:29
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笑笑2697

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2012-12-10 10:13:29
也许是蛋白不稳定呢，表达但是降解了，太小的蛋白是不太稳定的，还有一个N端氨基酸规则。

我的蛋白7、8kd。如果降解的话应该怎么避免降解呢？N端氨基酸规则具体指的是什么呢~
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4楼2012-12-10 20:46:47
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post_ngao

木虫 (正式写手)

科研宅

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
笑笑2697: 金币+1, ★有帮助 2012-12-10 22:18:15
情报太少了，很难判断。有可能是质粒构建的问题；有可能是宿主的问题；也有可能是表达的问题。不知楼主用的是什么质粒，什么宿主，什么条件。7-8kd确实不太大，不过如果宿主选择的没问题，表达条件都正确的话应该不至于被降解。如果担心降解可以在培养基中加入蛋白酶抑制剂，比如PMSF什么的。
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天命所归，各安其位
5楼2012-12-10 21:51:40
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