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求助大肠杆菌发酵问题 已有1人参与
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我们在做大肠杆菌的工程菌株发酵。以下是基本信息： 菌株为B21(DE3)； 携带质粒为PTRC99Z质粒（有外源基因）； 发酵罐：5L 培养基：多种培养基都试过。包括无机盐、复合培养基（配方见《高细胞密度发酵技术》 李寅 等 著，化学工业出版社）。碳源用过葡萄糖以及甘油，现象相似。 发酵液pH:6.8，以氨水调控； 发酵罐温度：25~30都用过，用以调节发酵初期细菌比生长速率； 发酵罐罐压：0.06、0.04MPa以及0.02MPa都试过； 转速：从400~900rpm都试过； 通气量：200L/h到400L/h都试过； 通过补料速率，控制溶氧为30%； 用的有机氮源: 1.酵母抽提物 2.蛋白胨 3.蛋白胨+酵母抽提物; 无机氮源： 1、磷酸二氢铵； 2、硫酸铵。 至于碳源浓度,都是培养基的初始碳源消耗完以后才开始流加，甘油做碳源的时候我没有测过培养基的碳源浓度，但是葡萄糖做碳源时候，斐林试剂滴定法测碳源浓度发现葡萄糖浓度较低，我的溶氧是由碳源流加速度控制的，溶氧浓度在30~60％。 乙酸的确抑制大肠杆菌生长，但是乙酸合成原因是什么?我一直怀疑是种子或溶氧的问题，造成乙酸的合成，进而抑制大肠杆菌生长，因为1）我们的甘油种子是保存在-20℃;2）很多文献包括论坛上都说要通入高浓度氧，而我从来没有用过。 现象： 不管培养基、发酵工艺是什么样，每次菌长到0D600=30，就开始增长速度极慢（期间没有加任何诱导剂哦）；尽管发酵液离心后沉淀量一直增加，但是OD600的吸光值变化不大，甚至有所降低； 发酵液粘度增加，泡沫较大； 碳源一直在消耗，但是生物量不增加，产酸量大（因为消耗氨水量大）； 离心后，菌泥呈两种颜色，下层为乳白色（颜色稍稍淡黄，健康大肠杆菌颜色），上层颜色较深。 遂请问各位达人，上述现象原因为何？如何解决这些问题？不通入高浓度氧时候，OD最高能到多少（请生产PHB和PHA的朋友忽略这个问题）？ [ Last edited by hanjun80 on 2012-12-10 at 05:43 ] |
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