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xiaoxia110

木虫 (正式写手)


[交流] 用含2M尿素的Tris-Hcl缓冲液能溶解包涵体吗?

实验室里原本研究的一种重组蛋白,全是包涵体形式的,而本人接下来做的是将这个蛋白分开两部分,分别进行表达,用大肠杆菌表达了一个重组蛋白,单用Tris-Hcl缓冲液重悬菌体,超声破碎后,跑蛋白电泳,发现上清中有很少量的目的蛋白,基本还是包涵体。但用含2M尿素的Tris-Hcl缓冲液重悬菌体,超声破碎后,发现上清中有不少的目的蛋白,大约将近50%吧。

这是什么原因呢?
1理论上2M的尿素是不溶解包涵体的啊?
2 溶解在2M尿素里的蛋白是变性状态的,还是正常结构的?
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xiaoxia110(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2012-12-09 17:55:40
1理论上2M的尿素是不溶解包涵体的啊?

尿素8M才能完全变性蛋白吧

2 溶解在2M尿素里的蛋白是变性状态的,还是正常结构的?

部分变性吧,你可以试着逐步透析(降低尿素的浓度),然后做酶活检测
2楼2012-12-09 17:15:14
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2012-12-09 18:04   回复  
xiaoxia110(金币+1): 谢谢参与
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