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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用含2M尿素的Tris-Hcl缓冲液能溶解包涵体吗？
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)

[交流] 用含2M尿素的Tris-Hcl缓冲液能溶解包涵体吗？

实验室里原本研究的一种重组蛋白，全是包涵体形式的，而本人接下来做的是将这个蛋白分开两部分，分别进行表达，用大肠杆菌表达了一个重组蛋白，单用Tris-Hcl缓冲液重悬菌体，超声破碎后，跑蛋白电泳，发现上清中有很少量的目的蛋白，基本还是包涵体。但用含2M尿素的Tris-Hcl缓冲液重悬菌体，超声破碎后，发现上清中有不少的目的蛋白，大约将近50％吧。

这是什么原因呢？
1理论上2M的尿素是不溶解包涵体的啊？
2 溶解在2M尿素里的蛋白是变性状态的，还是正常结构的？
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1楼 2012-12-09 16:43:42
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★ ★
xiaoxia110(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2012-12-09 17:55:40
1理论上2M的尿素是不溶解包涵体的啊？

尿素8M才能完全变性蛋白吧

2 溶解在2M尿素里的蛋白是变性状态的，还是正常结构的？

部分变性吧，你可以试着逐步透析（降低尿素的浓度），然后做酶活检测
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2楼2012-12-09 17:15:14
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kiss200855373楼
2012-12-09 18:04   回复  
xiaoxia110(金币+1): 谢谢参与
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