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porphybaby金虫 (正式写手)
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[求助]
你们每次实验一批会有多少个样品？如何提高处理的效率和减少操作误差？
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最近一直在做Western blot，以及流式细胞仪的实验。 我发现在样品的处理上，我每次都会有差不多10个以上，之后一个个都要处理，然后我又想小心一点，所以觉得动作好慢。而且整个的处理时间就长了。最后出来的结果，也不见得说误差就小，甚至可能根本就做不出来。 我一直觉得挺头疼的，如果样品数量太多，对于那种比如RNA的提取啊之类的 要求动作比较快、时间不宜长、很容易有降解比较脆弱的东西，就很不利？？ 你们遇到这种情况一般怎么处理呢？ 就是，到底要“小心”到什么程度呢？ |
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porphybaby
金虫 (正式写手)
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对啊 我主要纠结于一些细节： 1 移液枪 吸取很少的液体 比如1 uL 0.5 uL 可能有挂壁 还有些东西 容易粘在 枪头 比如溴酚蓝上样buffer 它就经常打不干净 有些东西 容易起泡 比如SDS 还有 细胞裂解液啊之类的 导致吸液的时候我总是觉得有误差 2 离心转速。我做流式凋亡双染实验，他们说1000转5分钟就可以把细胞离心到底部，可是我发现细胞根本就离不下来，是粘在壁上的。只有转速2000 或以上才会贴成一个小团。 我在裂解细胞、流式收集细胞那些过程，总是很怕这种离心造成的细胞损失。 3 多孔板加液、铺板、加药。还有药物浓度梯度稀释。这些过程也是涉及移液枪，然后我觉得在铺板、加药的时候那个力度控制，有的人又说要轻轻慢慢地加下去，不然会把细胞冲掉下来。但我看那些人做，他们都很粗暴的。 还有比如要换液，又说要吸尽培养基，那怎么吸啊，到底要多干？还有比如测MTT，要把上层吸出，我又觉得吸得快了会把MTT也一同吸掉，造成误差。 做标准曲线蛋白定量的时候，它要求在空的96孔板中先加蛋白，再加工作液。不过那些蛋白有的才1 uL 2 uL 你怎么可能在空的培养孔中加准确嘛。。。它又容易粘移液枪，又容易起泡泡。 4 细胞计数以及培养皿铺板 我总是觉得 细胞很容易沉降到离心管底，然后我去10 uL出来 在血球计数板上计数的时候 它其实是已经有开始在沉降了，测不准。 培养皿的话，死命摇 它都有可能铺不均匀。 5 冰上操作 中途拿出来离心、洗掉上清，这些过程你在冰上搞，怎么可能方便呢? 尤其是里头有细胞或沉淀，如果在冰上弄，你又看不到它里头那一小团，万一你的枪头戳到了，那不就冲散了么。如果拿出来的话，由于刚刚是冷的，它又喜欢有水汽结在管外，经常白蒙蒙一片。 |
3楼2012-12-08 16:39:30
cdl007
木虫 (正式写手)
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2楼2012-12-08 15:12:25
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4楼2012-12-08 17:13:50
10