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龙啸0216

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 纤维素分解菌，望高人指教已有1人参与

目前在做纤维素分解菌的提取工作，培养基为羧甲基纤维素钠、硫酸镁、酵母粉、磷酸氢二钾、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉；用1mg/L的刚果红染色15min、1mol/L的氯化钠脱色10min.发现菌体随着刚果红废液脱落，未出现透明圈，洗去菌体的地方未显红色，请问这能说明所提取的菌株无法降解纤维素吗？还有就是怎么能避免菌体脱落现象。。。谢谢

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新兵蛋子~~~

1楼2012-12-07 19:58:44

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Virginiaの

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

看了你的方法，我觉得你可以在培养基直接添加刚果红，制成CMC-刚果红琼脂培养基，这样如果CMC被降解就可以直观地看到水解圈了，不用再经过染色等麻烦的步骤。但是有一点，水解圈大的酶活未必就是高的，有一些水解圈小或者没有水解圈的也可能会有酶活力，建议你查阅这篇文献：
Teather RM, Wood PJ: Use of Congo red-polysaccharide interactions in enumeration and characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen
里面会讲到一些水解圈与酶活方面的关系，水解圈和酶活并不一定是成正比关系。你还需要通过液体培养然后进行酶活力测定才能确定是否有酶活。之前我在平板上看到有水解圈，但是进行液体培养后测酶活，结果显示没有检测到纤维素酶酶活，也有可能我选用的液体培养基不合适，所以现在也需要用不同液体培养基进行尝试，总之就是要多查阅文献。
还有一个问题，你培养基中有蛋白胨，如果有蛋白酶产生，那么也有可能会出现水解圈，之前我所用的筛选培养基中有明胶（肽分子聚合物质），有一次老师提过说水解圈可能是因为明胶降解后产生的，所以我把明胶去掉后，发现没有水解圈了，所以在筛选培养基中，你所用的天然成分应该尽量少一些，以免带来不必要的干扰。另外一篇参考文献：
张壮志：高效纤维素分解菌的筛选、鉴定及其生长条件和产酶活性的研究