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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关酶学性质温度稳定性实验
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 有关酶学性质温度稳定性实验

我现在在做酶学性质研究，目前确定该酶的最适温度是100℃。但在做温度稳定性实验中有个概念一直没弄清楚。
问题：我选40℃，60℃，80℃，100℃这几个点为测定温度。我是先分别在这几个温度点放置一段时间，然后再在相对应的温度下与底物反应？还是先在这几个温度点放置一段时间，再在100℃下与底物反应？
拜托各位啦
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nothing isimpossible
1楼 2012-12-07 13:33:22
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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hraikeyan: 金币+5 2012-12-07 14:53:29
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-07 16:32:55
应该是先在这几个温度点放置一段时间，再在100℃下与底物反应。
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2楼2012-12-07 14:51:56
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dmzha at 2012-12-07 14:51:56
应该是先在这几个温度点放置一段时间，再在100℃下与底物反应。

谢谢啦
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nothing isimpossible
3楼2012-12-07 14:54:38
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哆啦B梦1024

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dmzha at 2012-12-07 14:51:56
应该是先在这几个温度点放置一段时间，再在100℃下与底物反应。

请问你是做过这个的吧？确定吗？看来我得重做了……pH稳定性你是怎么弄的呢 我现在是把酶放置在不同pH下，100度（最适温度），然后和底物反应（也是100度），这样行吗？谢谢你了！！！
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4楼2012-12-07 15:49:37
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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 哆啦B梦1024 at 2012-12-07 15:49:37
请问你是做过这个的吧？确定吗？看来我得重做了……pH稳定性你是怎么弄的呢 我现在是把酶放置在不同pH下，100度（最适温度），然后和底物反应（也是100度），这样行吗？谢谢你了！！！...

pH稳定性：把酶放置在不同pH下，然后最适温度、最适pH条件下测酶活。
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5楼2012-12-07 16:15:18
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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-12-07 14:54:38
谢谢啦...

不用谢！补充一点：还要在最适温度和pH条件下测酶活。
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6楼2012-12-07 16:18:40
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哆啦B梦1024

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dmzha at 2012-12-07 16:15:18
pH稳定性：把酶放置在不同pH下，然后最适温度、最适pH条件下测酶活。...

呃？放置酶的时候是什么温度呢？室温还是最适温度？还有啊，测酶活的时候酶已经在某一pH下了啊 是再调pH到最适的吗？
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7楼2012-12-07 16:24:11
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助 2012-12-10 13:59:38
不知道楼主是为了测定什么，如果酶100度稳定而且活性最高，你放在40，60，80度对它的活性不会有影响啊。

我的理解是，整个酶反应体系应该放在40度，60度，80度，100度，然后作活性和1/T的曲线。

如果测pH的稳定性，是用MTCN buffer, 这是为了保证离子强度一致，你把MTCN调整到你需要的pH，然后分别测，然后作活性和pH曲线，看是一个拐点还是两个拐点，然后推测活性中心的氨基酸残基。
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行至水穷处，坐看云起时
8楼2012-12-10 09:45:11
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dmzha

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 哆啦B梦1024 at 2012-12-07 16:24:11
呃？放置酶的时候是什么温度呢？室温还是最适温度？还有啊，测酶活的时候酶已经在某一pH下了啊 是再调pH到最适的吗？...

放置酶的时候我采用的是该细菌的培养温度，当然室温也行，但是不同季节室温是不同的，最后采用一个固定的温度。测酶活不是要在一个Buffer中进行吗？而且测酶活的时候，加酶量很少的，酶液本身的pH对Buffer的pH影响可以忽略。Buffer的pH调成酶的最适反应pH就行了。
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9楼2012-12-10 15:12:40
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哆啦B梦1024

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by dmzha at 2012-12-10 15:12:40
放置酶的时候我采用的是该细菌的培养温度，当然室温也行，但是不同季节室温是不同的，最后采用一个固定的温度。测酶活不是要在一个Buffer中进行吗？而且测酶活的时候，加酶量很少的，酶液本身的pH对Buffer的pH影响 ...

谢谢你啊！！！看来就要调到最适pH的啊！再次感谢！！！
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10楼2012-12-10 15:30:33
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