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unanus

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助：关于EDC/NHS反应的沉淀问题

做酰胺反应，将蛋白质连接到只含一个羧基的反应物上，向含羧基的反应物中加入EDC和NHS后，为什么所有的反应物都到沉淀中了？PBS的pH值是5.8，后来用水溶液也出现同样的结果，我用的羧基:EDC:NHS=1:10:10。这是怎么回事啊？请有经验的虫虫指点迷津啊，谢谢啦！
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1楼 2012-12-07 11:34:28
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qlzhang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Meteorの泪: 金币+1, 鼓励交流~ 2012-12-10 09:18:41
有可能是反应发生的非常快，生成了酯，溶解度降低所以沉淀。
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2楼2012-12-08 04:59:08
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unanus

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qlzhang at 2012-12-08 04:59:08
有可能是反应发生的非常快，生成了酯，溶解度降低所以沉淀。

谢谢，再问一下，生成酯的反应很完全吗？我的反应物是有颜色的，沉淀离心后上清液是无色的，应该是全在沉淀中。
我先试着降低EDC和NHS的浓度看看有没有效果吧。
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3楼2012-12-09 17:24:46
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qlzhang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
Meteorの泪: 金币+1, 鼓励交流~ 2012-12-10 09:18:47
这个反应应该还算彻底，类似的条件我一般能拿到95%左右的转化率。
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4楼2012-12-09 22:14:16
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unanus

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qlzhang at 2012-12-09 22:14:16
这个反应应该还算彻底，类似的条件我一般能拿到95%左右的转化率。

也是在水溶液中做到吗？
我还是没解决沉淀的问题，如果缩小羧基与EDC的比例不知道转化率会不会降低呢？
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5楼2012-12-09 23:35:34
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zhiman2011

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by unanus at 2012-12-09 23:35:34
也是在水溶液中做到吗？
我还是没解决沉淀的问题，如果缩小羧基与EDC的比例不知道转化率会不会降低呢？...

请问最后是什么原因导致的呢，我也碰到这个问题
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6楼2018-07-13 10:15:56
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zhiman2011

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qlzhang at 2012-12-08 04:59:08
有可能是反应发生的非常快，生成了酯，溶解度降低所以沉淀。

那如何改进才能不出现沉淀呢
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7楼2018-07-13 11:30:44
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zhiman2011

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by unanus at 2012-12-09 23:35:34
也是在水溶液中做到吗？
我还是没解决沉淀的问题，如果缩小羧基与EDC的比例不知道转化率会不会降低呢？...

请问降低EDC和NHS的浓度问题解决了吗
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8楼2018-07-13 11:48:12
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unanus

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhiman2011 at 2018-07-13 11:48:12
请问降低EDC和NHS的浓度问题解决了吗...

将EDC和NHS的水溶液浓度降低一些，缓慢加入可避免生成沉淀
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9楼2019-09-17 09:41:42
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