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a71840584

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白

测的SOD、CAT、POD、MDA趋势都很好，但是蛋白测的就很乱，结果最后导致趋势全没了，蛋白就是用考马斯亮蓝测的，标曲一次就测了俩9出来，测蛋白的时候也没出很么问题，为什么这么乱呢，植物在受到损伤体内蛋白是减少的还是增加的能确定吗？我是用0.05mol,pH7.8的磷酸盐缓冲液研磨样品的，里面还含1%的PVP和1mM的EDTA，另外PVP这个东西会和考马斯反应吗？
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
1楼 2012-12-05 22:53:11
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by a71840584 at 2012-12-05 23:43:35
配的应该没问题吧，配了好多次了，测标曲的时候没问题啊，一次就测到R2=0.9949，我这次配的多。配了2升，最后测标曲的时候，没加蛋白的考马斯亮蓝测吸光度都有0.7多，但是应该没问题吧...

测定的时候我习惯用考马斯亮蓝染液加水调零，一般分光光度计大于0.8以上的值都不准确
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4楼2012-12-06 00:10:29
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PVP不会影响考马斯亮蓝法测定蛋白质，有些方法中还专门添加PVP减小酚类对显色反应的影响。楼主的考马斯亮蓝染色液是否配置正确？常见配制方法为100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1  95％乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，配好后滤纸过滤。
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2楼2012-12-05 23:05:34
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-12-05 23:05:34
PVP不会影响考马斯亮蓝法测定蛋白质，有些方法中还专门添加PVP减小酚类对显色反应的影响。楼主的考马斯亮蓝染色液是否配置正确？常见配制方法为100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1  95％乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用 ...

配的应该没问题吧，配了好多次了，测标曲的时候没问题啊，一次就测到R2=0.9949，我这次配的多。配了2升，最后测标曲的时候，没加蛋白的考马斯亮蓝测吸光度都有0.7多，但是应该没问题吧
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
3楼2012-12-05 23:43:35
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a71840584

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2012-12-06 00:10:29
测定的时候我习惯用考马斯亮蓝染液加水调零，一般分光光度计大于0.8以上的值都不准确...

哦我的是用去离子水调零，你用考马斯调零你的标曲岂不是要过原点，我这次的考马斯确实没配好。。。，刚配完去测标曲的时候没加蛋白的考马斯吸光度有0.7+，放冰箱静止两天后再去测只有0.6，再静置两天再去测只有0.55。。，还有我的标准蛋白是1mg/ml的，测的时候加0.1ml各浓度标蛋测标曲，但是磨完样测蛋白的时候我加0.1ml酶液考马斯就变很蓝所以我要稀释，只取20μL去测蛋白，但是20μL太少了就一滴不容易打出来所以觉着老有误差，我是不是可以吧标准蛋白配的大一点，比如2mg/ml，这样就不用稀释去测蛋白了
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
5楼2012-12-09 20:16:29
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