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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酿酒酵母基因敲除敲除盒的构建
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

[求助] 酿酒酵母基因敲除敲除盒的构建

酿酒酵母的基因敲除中敲除片段的构建以下两种形式有什么区别么？
1，启动子+ATG…… +抗性基因+……TAA+终止子
2，启动子+抗性基因+终止子
就是说在敲除中有目的基因片段做同源臂和没有目的基因同源臂有什么区别么？
谢谢了！！
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姥姥不疼，舅舅不爱
1楼 2012-12-04 17:48:48
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
咆哮的白菜: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-12-05 10:13:50
有目的片段的敲除是不完全敲除，该基因还是能表达一段比较小的短肽，不过是没有了原基因的表达活性；不带目的基因做同源臂的敲除为完全敲除，不会有该基因片段的任何表达。
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Thank-you，so-blue.
2楼2012-12-05 09:06:58
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-05 09:06:58
有目的片段的敲除是不完全敲除，该基因还是能表达一段比较小的短肽，不过是没有了原基因的表达活性；不带目的基因做同源臂的敲除为完全敲除，不会有该基因片段的任何表达。

在抗性基因有自己的启动子的情况下，目的基因的启动子启动转录，合成目的基因的一个短肽，会不会对抗性基因的表达有影响呢？
目的基因启动子+ATG（目的基因）…………（没有TAA）+（抗性基因带自己启动子）…………
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姥姥不疼，舅舅不爱
3楼2012-12-05 09:38:40
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
3楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2012-12-05 09:38:40
在抗性基因有自己的启动子的情况下，目的基因的启动子启动转录，合成目的基因的一个短肽，会不会对抗性基因的表达有影响呢？
目的基因启动子+ATG（目的基因）…………（没有TAA）+（抗性基因带自己启动子）……… ...

不会，抗性基因有自己单独的启动子，不受影响。
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Thank-you，so-blue.
4楼2012-12-05 09:44:29
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-05 09:44:29
不会，抗性基因有自己单独的启动子，不受影响。...

最后一个问题
启动子+基因A（无终止密码子）+基因Ｂ（含终止密码子）＋基因Ｃ（含终止密码子）＋终止子
这样会表达一个什么样的蛋白呢？
谢谢！
赞一下 回复此楼
姥姥不疼，舅舅不爱
5楼2012-12-05 10:15:53
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
5楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2012-12-05 10:15:53
最后一个问题
启动子+基因A（无终止密码子）+基因Ｂ（含终止密码子）＋基因Ｃ（含终止密码子）＋终止子
这样会表达一个什么样的蛋白呢？
谢谢！...

AB基因融合表达了，如果启动子够强，C 基因也能表达。
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Thank-you，so-blue.
6楼2012-12-05 10:39:26
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by susizheng at 2012-12-05 10:39:26
AB基因融合表达了，如果启动子够强，C 基因也能表达。...

谢谢，如果Ｃ表达的话，应该是一个独立的蛋白，不是融合蛋白吧？
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姥姥不疼，舅舅不爱
7楼2012-12-05 11:15:06
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susizheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2012-12-05 11:15:06
谢谢，如果Ｃ表达的话，应该是一个独立的蛋白，不是融合蛋白吧？...

对
8楼2012-12-05 11:40:04
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