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wang_shan

铁虫 (初入文坛)

[求助] 原代肝细胞培养

我培养的原代肝细胞，第一天还好，到了第二天就开始出现一缕一缕的浑浊，时间越久，浑浊就越多。我以为是双抗的问题，换了新的，还是这样。提取的过程中我又多离心了几次，结果还是一样。所有的东西我都灭了好多次菌了...请问有谁知道这是什么情况啊？
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1楼 2012-12-04 16:28:56
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wq0616

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2012-12-05 20:19:31
是不是染菌了？培养基浑浊有可能是染菌了。
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艰难困苦，玉汝于成。
2楼2012-12-05 15:04:48
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wang_shan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wq0616 at 2012-12-05 15:04:48
是不是染菌了？培养基浑浊有可能是染菌了。

可是每一步操作都按照以前那么做的，培养箱也刚消过毒，所有东西都灭了菌，双抗是新的，已经做过四五次了，每次都一样。请问能不能帮忙分析一下是什么地方出了问题啊？
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3楼2012-12-05 19:53:05
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wang_shan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wq0616 at 2012-12-05 15:04:48
是不是染菌了？培养基浑浊有可能是染菌了。

我仔细想了一下，我培养的肝细胞，从提取出来，四个小时后换液的时候发现里面有一缕缕白色沙子样的东西，不过当时培养基还是澄清的，到第二天的时候才开始出现这种情况。我把几乎所有浑浊的培养基都吸了出来，换上新的，第三天更严重了，还变臭了。请问，是不是提取出来的的时候出了问题啊？有什么经验么？是在是无能为力了。。。
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4楼2012-12-07 20:43:16
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wq0616

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wang_shan at 2012-12-07 20:43:16
我仔细想了一下，我培养的肝细胞，从提取出来，四个小时后换液的时候发现里面有一缕缕白色沙子样的东西，不过当时培养基还是澄清的，到第二天的时候才开始出现这种情况。我把几乎所有浑浊的培养基都吸了出来，换上 ...

不好意思，我也想不出为什么，无能为力了。抱歉，不能帮助你了。
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艰难困苦，玉汝于成。
5楼2012-12-07 21:53:17
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云淡风轻小刚

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

根据你的描述，我觉得可能是你的原代肝细胞有问题？建议你一步步盘查
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6楼2012-12-08 09:41:21
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wang_shan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 云淡风轻小刚 at 2012-12-08 09:41:21
根据你的描述，我觉得可能是你的原代肝细胞有问题？建议你一步步盘查

我觉得是肝细胞提取过程中出了问题，正在一步步检查之中。请问，如果酶灌流液中HEPEs少加了好多，用HCL将PH调到7.6后加的胶原酶，会不会是这个的原因啊？？因为我这几次一直是胶原酶加少了。谢谢啦！
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7楼2012-12-08 15:43:27
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wang_shan

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 云淡风轻小刚 at 2012-12-08 09:41:21
根据你的描述，我觉得可能是你的原代肝细胞有问题？建议你一步步盘查

您好，我最近一直在查找原因。现在的情况是，用两步灌流法提取出细胞，将其培养的培养板上后，当时就会看到白色细沙状沉淀，培养两天后培养基倒是没变浑浊，可是培养板下面就会结一层白色的膜，把细胞都覆盖住了。我请别人看过了，提取的过程没有问题。请问，能不能帮忙分析一下，是不是酶或者什么溶液有问题啊？或者是发生反应产生的？用percoll分离液分离一下会不会好啊？实在是走投无路了。万分感激啊...
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8楼2012-12-31 20:15:52
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云淡风轻小刚

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个我也不太清楚，我不做原代细胞的提取这方面的工作，对于这些操作不是很了解。不要着急，再找找原因呢！
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9楼2013-01-03 13:06:20
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sunflower_J

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是不是细胞太多 而且贴壁不好 所以看上去像杂菌
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10楼2013-08-27 09:55:07
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