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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何制作干粉
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星星杨

铜虫 (初入文坛)

[求助] 如何制作干粉

大家好啊！我买了几株双歧杆菌，复活培养后想把一部分做成干粉留着以后用，有哪位大侠知道该怎么做啊?谢谢了啊！
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1楼 2012-12-04 09:00:42
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
星星杨: 金币+1, ★有帮助 2012-12-05 09:33:54
10％灭菌的脱脂乳洗下菌体，加到安瓿管中，冷冻抽真空干燥，制做的时间比较长，不太好做。建议用20-25％的无菌甘油保藏也可以，放入-80度的低温冰箱保藏2-3年没问题。
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星星杨
2楼2012-12-04 13:35:50
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wgy2007

木虫 (小有名气)
我们做的时候都不用洗涤的，直接做就可以，离心洗涤菌体没有做过，感觉应该不复杂，用液体培养好的菌体用无菌离心管离心，弃去上清液，加无菌生理盐水悬浮菌体后再离心，弃掉上清液，感觉上清液比较混浊可以多洗几次，用与菌液等体积或两倍体积的20-25％的无菌甘油悬浮菌体，加到冻存管中保藏即可。
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7楼2012-12-06 10:42:02
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星星杨

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-12-04 13:35:50
10％灭菌的脱脂乳洗下菌体，加到安瓿管中，冷冻抽真空干燥，制做的时间比较长，不太好做。建议用20-25％的无菌甘油保藏也可以，放入-80度的低温冰箱保藏2-3年没问题。

以实验室现有的条件安瓿管是做不到了，能不能告诉我用甘油保藏的具体方法？
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3楼2012-12-05 09:33:43
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wgy2007

木虫 (小有名气)
★ ★
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-05 15:12:54
用液体培养基培养你的菌，不知道你的菌生长周期多长，一般培养到对数生长末期（约20-24小时），配制50％的甘油，121度灭菌30分钟，与培养好的菌液按1：1的比例混合均匀，分装无菌的冻存管，分装后放入低温冰箱-80度保藏，使用时解冻后可以转接斜面、平板或直接接液体培养基培养都可以。这种菌种保藏的方法制作简单，厌氧菌保藏期三年以上没问题。
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4楼2012-12-05 14:57:53
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星星杨

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-12-05 14:57:53
用液体培养基培养你的菌，不知道你的菌生长周期多长，一般培养到对数生长末期（约20-24小时），配制50％的甘油，121度灭菌30分钟，与培养好的菌液按1：1的比例混合均匀，分装无菌的冻存管，分装后放入低温冰箱-80度 ...

这个不用离心洗涤之类的吗？我看别处有这样的保藏方法
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5楼2012-12-05 21:49:45
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星星杨

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-12-05 14:57:53
用液体培养基培养你的菌，不知道你的菌生长周期多长，一般培养到对数生长末期（约20-24小时），配制50％的甘油，121度灭菌30分钟，与培养好的菌液按1：1的比例混合均匀，分装无菌的冻存管，分装后放入低温冰箱-80度 ...

这个不用离心洗涤之类的吗？我看别处有这样的保藏方法，可具体操作我不会，能够告诉我一下，我好做个比较！
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6楼2012-12-06 09:57:20
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紫郁傲空

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wgy2007 at 2012-12-05 14:57:53
用液体培养基培养你的菌，不知道你的菌生长周期多长，一般培养到对数生长末期（约20-24小时），配制50％的甘油，121度灭菌30分钟，与培养好的菌液按1：1的比例混合均匀，分装无菌的冻存管，分装后放入低温冰箱-80度 ...

-80保藏的时候，要快速冷冻，还是分步冷冻，比如先放置4℃，后-20℃，最后-80℃？？？
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实践
8楼2012-12-08 14:31:02
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2009jxncmeet

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 紫郁傲空 at 2012-12-08 14:31:02
-80保藏的时候，要快速冷冻，还是分步冷冻，比如先放置4℃，后-20℃，最后-80℃？？？...

不需要按照冻存细胞的那种分布降温冻存法，直接放到-80度就行
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潜移默化地不断追求科研真谛
9楼2012-12-08 16:35:20
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wgy2007

木虫 (小有名气)
跟楼上说的一样，做好后直接放入-80就行。
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10楼2012-12-09 12:21:59
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