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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 急求解答，药代组织分布的困惑
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richbird

捐助贵宾 (著名写手)

小木虫二手科学家
★
xiaoxiao270: 金币+1 2012-12-05 12:30:36
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-12-04 21:37:50
你好！
关于你提到的：
3.组织剪碎，然后按照组织重量加入9份的甲醇水（1：1）。匀浆用匀浆机最好，速度快，省时省力。另外，方法学要对稳定性研究充分考察。测定浓度乘以10换算为组织浓度。
加入9份甲醇水，是 ...

既然是做科研，对于分析灵敏度的问题，尽量用分析化学的手段解决，如通过建立高灵敏度的分析方法。而且这本身就是一篇文章。
匀浆介质太少不利于组织匀浆。如果不能充分匀浆，待测化合物无法释出，则可能低估组织分布。尤其是一些韧性强的组织，如皮肤。
在制备组织标准曲线时候，我们是在组织匀浆中添加标曲工作液，所以测定浓度是匀浆液浓度。而匀浆液把组织稀释了10倍（即一份组织加入9份匀浆介质），所以需要乘以稀释系数10。
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一步步实现自己的理想，永远不要停下脚步。
11楼2012-12-05 11:19:48
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lsytt

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2012-12-05 12:30:40
组织匀浆可以用PBS（w:v=1:5），用电动匀浆器吧 省时省力，根据你药物的性质看是否要加冰，匀浆完离心取上清，然后液液萃取或固相萃取等方法处理，最后可以适当的浓缩一下。
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12楼2012-12-05 12:12:33
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by richbird at 2012-12-05 11:19:48
既然是做科研，对于分析灵敏度的问题，尽量用分析化学的手段解决，如通过建立高灵敏度的分析方法。而且这本身就是一篇文章。
匀浆介质太少不利于组织匀浆。如果不能充分匀浆，待测化合物无法释出，则可能低估组织 ...

谢谢你的回答。
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心态比能力重要
13楼2012-12-05 14:25:11
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by lsytt at 2012-12-05 12:12:33
组织匀浆可以用PBS（w:v=1:5），用电动匀浆器吧 省时省力，根据你药物的性质看是否要加冰，匀浆完离心取上清，然后液液萃取或固相萃取等方法处理，最后可以适当的浓缩一下。

我做实验时，也是组织匀浆完，先高速离心（12000rpm/5min），然后取上清进行液液萃取的。有的同学提出，应该直接用匀浆进行萃取，而不能离心后取上清萃取、测定，离心后取上清萃取再测定使某些成分含量显著降低。不知道这种做法是否合适呢（直接用组织匀浆，或者离心后取上清）？
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心态比能力重要
14楼2012-12-05 14:29:53
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richbird

捐助贵宾 (著名写手)

小木虫二手科学家
引用回帖:
14楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-12-05 14:29:53
我做实验时，也是组织匀浆完，先高速离心（12000rpm/5min），然后取上清进行液液萃取的。有的同学提出，应该直接用匀浆进行萃取，而不能离心后取上清萃取、测定，离心后取上清萃取再测定使某些成分含量显著降低。不 ...

有的同学担心是很有道理的。药物在各组织均有一定的结合能力，而且大部分药物的binding ratio高于50%，甚至达到99%。离心时，部分药物结合在组织上，无法溶解在溶液中，导致上清液的浓度无法代表组织中实际浓度。尤其是用PBS作为匀浆介质时，大部分药物的水溶性都不好，无法溶解在PBS中，要么结合在组织被离心掉，要么游离出来变成沉淀被舍弃。采用这种方法测得的浓度有一定的可能是药物在上清液中的溶解度。
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一步步实现自己的理想，永远不要停下脚步。
15楼2012-12-05 15:31:38
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by richbird at 2012-12-05 15:31:38
有的同学担心是很有道理的。药物在各组织均有一定的结合能力，而且大部分药物的binding ratio高于50%，甚至达到99%。离心时，部分药物结合在组织上，无法溶解在溶液中，导致上清液的浓度无法代表组织中实际浓度。尤 ...

谢谢你的细致回答！非常有帮助且值得思考。
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16楼2012-12-05 15:37:41
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liyu6019

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100: 金币+1, 谢谢回帖！ 2012-12-13 00:21:04
1 测血药浓度时间点是15min,30min,1h,2h,4h,6h,8h,10h,12h   做组织分布的话，选取几个点比较好？
不同意七楼观点，组织分布取三个时间点即可，三个时间点根据药时曲线选择：吸收相，分布相，消除相

2 组织分布至少要做哪几个脏器？可以直接把一个时间点的6只老鼠的同一脏器一起研磨取上清吗？
同意七楼观点

3 脏器要怎么制成匀浆？可以用研钵研磨吗？需要加多少的溶液（PBS或生理盐水）到时候怎么算浓度？
基本同意七楼观点。不过你是采用ELISA，建议采用PBS来制备匀浆，可以采用1:4匀浆或者更多或者更少（太少不太利用匀浆），稀释的倍数可以根据你的检测线来定。
4.关于测定浓度乘以10，换算为组织浓度，我不太能够理解，各组织中浓度的测定也是根据标准曲线，以各组织的空白匀浆进行的，方法学考察也是以空白匀浆进行的，最终测得的浓度为何要乘以 10呢？
将组织的密度和水的密度相当来算。你的标曲和你样品的做法是不一样的。具体细聊。
这个问题
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17楼2012-12-12 11:53:38
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s7f3z9

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-12-04 21:37:50
你好！
关于你提到的：
3.组织剪碎，然后按照组织重量加入9份的甲醇水（1：1）。匀浆用匀浆机最好，速度快，省时省力。另外，方法学要对稳定性研究充分考察。测定浓度乘以10换算为组织浓度。
加入9份甲醇水，是 ...

测出的浓度相当于是组织浓度稀释十倍得到的结果，要得到组织浓度需乘上10    测出浓度为c1 实际浓度为c2 组织液体积为x 则稀释后变成了10x
由c1乘以10x=c2乘以x，由此可得c2=10c1
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18楼2012-12-12 16:59:13
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