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首次使用液质联用问题请教
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1、准备使用液质联用测量酿酒酵母胞内代谢物含量，现有的是C18柱子，请问，要测定氨基酸及一些小分子多肽还有有机酸，是否需要柱前衍生化，如果需要使用，那是用PITC，还是OPA或者其他的衍生剂？考虑价格毒性、定量准确性。 2、液质联用流动相一般用甲醇，乙腈就行吗？还需要在液相上实验分离条件吗？在另外的液相上，使用另外的C18，获得的实验流动相条件，可以用于液质使用吗？ 3、最后物质的定量是由质谱图确定的吗？是不是每一种物质的绝对定量都需要加入标准品？ 4、可否简要说明一下首次使用液质联用的步骤？比如先确定流动相组成，用各种标品混合物全扫描一次，等等。要自己做的，有经验的那种。 问题很多，新手， 多谢。 祝实验都顺利啊 |
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chenyawei: 金币+10, ★★★很有帮助, 不好意思，新手不知道怎么奖励金币，谢谢你的耐心回复 2012-12-27 13:16:23
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1 不用，但有可能要挑选C18柱子 2 液质连用常用溶剂是甲醇，乙腈，水，其他溶剂的使用请参考柱子说明。尽量在LC系统完成分离，可用MS作为检测器(MS的作用相当于UV),做LCMS寻找合适的LC 分离条件。如果流速合适，LC系统允许，使用相同的C18柱子，LC条件可以直接用，但是进质谱需要分流或者调谐质谱达到最佳效果。 3 物质定量是由total ion chromatography的峰（使用peak area ratio)确定，需要加入internal standard（至少一种) 4 液质一般来说，a) 先直接单一样品(标样)进样，做MS full scan 确定母离子，做MS/MS 确定母离子/子离子对。 b) 每个标样做LCMS （SIM 或full scan 模式), 确定可以尽量在column上就可以分离所有的感兴趣的化合物。 c) 混合或单一标样进样做LCMS （MRM 模式，最终定量使用模式），调谐质谱，找到适合所有标样的质谱参数。 d) 混合样加内标做 LCMS, 确定内标的浓度。 e) 单一标样或混合加内标进样做LCMS (MRM 模式)，找各标样的线性浓度范围。 f) 加一系列已知浓度的某一(或多个)标样（含内标）历经整个实验过程做标准样品曲线。 g) 背景样品（不加酿酒酵母胞内代谢物），实际样品 （加酿酒酵母胞内代谢物），标准曲线样品（加酿酒酵母胞内代谢物）同步制备，检测。 |
4楼2012-12-06 00:34:34
