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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 首次使用液质联用问题请教
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chenyawei

金虫 (小有名气)

[求助] 首次使用液质联用问题请教

1、准备使用液质联用测量酿酒酵母胞内代谢物含量，现有的是C18柱子，请问，要测定氨基酸及一些小分子多肽还有有机酸，是否需要柱前衍生化，如果需要使用，那是用PITC，还是OPA或者其他的衍生剂？考虑价格毒性、定量准确性。
2、液质联用流动相一般用甲醇，乙腈就行吗？还需要在液相上实验分离条件吗？在另外的液相上，使用另外的C18，获得的实验流动相条件，可以用于液质使用吗？
3、最后物质的定量是由质谱图确定的吗？是不是每一种物质的绝对定量都需要加入标准品？
4、可否简要说明一下首次使用液质联用的步骤？比如先确定流动相组成，用各种标品混合物全扫描一次，等等。要自己做的，有经验的那种。
     问题很多，新手，  多谢。
       祝实验都顺利啊
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1楼2012-12-03 14:02:32
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chenyawei

金虫 (小有名气)
求助高人啊
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2楼2012-12-03 15:00:16
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亦木澜

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是初学，不过液质条件是师姐师兄们已经摸好的，只需要稍微优化一下。一般液质都会配有一本教程呀，一步一步的教，要全扫描母离子，子离子；再分别扫描母离子，子离子优化质谱条件；最后连上液相优化液相条件。说的简单，但是操作也得个熟悉了才敢动手。把质谱当成液相中的紫外检测器吧，祝你成功~
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3楼2012-12-05 21:54:58
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lzjessie_wlf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
chenyawei: 金币+10, ★★★很有帮助, 不好意思，新手不知道怎么奖励金币，谢谢你的耐心回复 2012-12-27 13:16:23
1 不用，但有可能要挑选C18柱子
2 液质连用常用溶剂是甲醇，乙腈，水，其他溶剂的使用请参考柱子说明。尽量在LC系统完成分离，可用MS作为检测器(MS的作用相当于UV),做LCMS寻找合适的LC 分离条件。如果流速合适，LC系统允许，使用相同的C18柱子，LC条件可以直接用，但是进质谱需要分流或者调谐质谱达到最佳效果。
3 物质定量是由total ion chromatography的峰（使用peak area ratio)确定，需要加入internal standard（至少一种)
4 液质一般来说，a) 先直接单一样品(标样)进样，做MS full scan 确定母离子，做MS/MS 确定母离子/子离子对。
  b) 每个标样做LCMS （SIM 或full scan 模式), 确定可以尽量在column上就可以分离所有的感兴趣的化合物。
    c) 混合或单一标样进样做LCMS （MRM 模式，最终定量使用模式），调谐质谱，找到适合所有标样的质谱参数。
   d) 混合样加内标做 LCMS, 确定内标的浓度。
   e) 单一标样或混合加内标进样做LCMS (MRM 模式)，找各标样的线性浓度范围。
   f)  加一系列已知浓度的某一(或多个)标样（含内标）历经整个实验过程做标准样品曲线。
  g)  背景样品（不加酿酒酵母胞内代谢物），实际样品 （加酿酒酵母胞内代谢物），标准曲线样品（加酿酒酵母胞内代谢物）同步制备，检测。
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4楼2012-12-06 00:34:34
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