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fuq1736

木虫 (著名写手)

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[求助] 求助一下，乙酰胆碱酯酶冰水中活性如何，算不算是终止反应了？？

本人用乙酰胆碱酯酶，sigma 电鳗鱼的，实时监控酶反应，反应在37度碳酸氢铵缓冲溶液中进行，因为试验中有自动进样器，从进样开始走管路有1.2秒时间，这中间反应体系会被稀释，需要简单而且在线的终止反应，加入有机溶剂可能会终止反应。所以希望用冰水浴把反应速度下降到可以忽略为止。（反应时间20min以内吧)，有没有人试过用冰水浴终止酶反应的，介绍介绍实践经验，或者有人介绍一个用冰水浴终止反应的文献，也给金币。
本来个人觉得，用7度的冷水浴已经可以把1.2秒的误差降低到0.15秒左右了，相对于酶反应动力学测定时前20分钟直线阶段的时间来说，完全可以忽略了，可惜老板非说别人差一两秒人家是公认的，就不算差，我差0.15秒就不是公认的，就算差。
不要和我说温度降十度反应速度降两倍，这些我都知道。
另外求助一个小问题，测定米氏常数需要一系列底物浓度，然后测定每个底物浓度下的反应初速度，我可以从反应开始以后约2min以内吧（具体多少时间，无法确定）每隔1min（很准确，就是感刚好一分钟，一秒不差，自动取样）测定一次底物浓度和产物浓度，但是就是不知道反应起始时间，只知道大概起始了2min以内，反应速度还很恒定。请问我这么测定，应该也是可以通过双倒数作图法，测定出米氏常数的吧？老板非说得知道起始时间，但是我问过好多人，都说不需要。
附图一张，曲线是反应的初速度，直线是双倒数作图法，不知道反应起始时间，是不是没有问题？

未命名.JPG

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