| 查看: 1471 | 回复: 5 | |||
summer2771木虫 (正式写手)
|
[求助]
做信号通路的，是不是要做定位才好！？
|
| 请问大家，大家一般做通路蛋白，都做了定位嘛？比如免疫荧光！？谢谢！我看很多文章也都只做了蛋白表达，没有做定位的。但是荧光图确实漂亮，感觉能出彩些。不知道通路蛋白是不是这样的？ |
回复此楼» 猜你喜欢
080200学硕，机械工程专业277分，求带走！
已经有7人回复
-
377求调剂
已经有3人回复
-
295求调剂
已经有8人回复
-
086000生物与医药298调剂求助
已经有10人回复
-
0860 求调剂 一志愿国科大 348 分
已经有3人回复
-
材料调剂
已经有4人回复
-
本科211生物医学工程085409求调剂339分
已经有9人回复
-
296求调剂
已经有5人回复
-
385分 生物学（071000）求调剂
已经有11人回复
-
308求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问做细胞信号转导通路的大神，能否只做磷酸化不做总量？
已经有7人回复
- 细胞信号通路大全
已经有493人回复
- 细胞信号通路研究初学者经验交流
已经有23人回复
- 求与细胞炎症相关的信号通路？
已经有8人回复
- 信号通路
已经有10人回复
- 研究细胞信号转导通路，建立细胞系，是否一定要敲出细胞内源性蛋白分子？
已经有8人回复
- 最新细胞各种信号通路概括~cell上的~
已经有61人回复
- 【求助/交流】抗癌药物-凋亡-western
已经有17人回复
- 【求助/交流】关于蛋白影响信号通路
已经有4人回复
- 【求助/交流】信号通路如何研究？
已经有13人回复
laoboshihou
金虫 (正式写手)
- 应助: 33 (小学生)
- 金币: 724.2
- 红花: 2
- 帖子: 528
- 在线: 75.5小时
- 虫号: 1947736
- 注册: 2012-08-20
- 专业: 神经生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
summer2771: 金币+8, 谢谢您的回帖！ 2012-12-01 01:05:17
summer2771: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2012-12-23 02:50:53
感谢参与，应助指数 +1
summer2771: 金币+8, 谢谢您的回帖！ 2012-12-01 01:05:17
summer2771: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2012-12-23 02:50:53
|
通路蛋白通常只做定量，但也有少数做定位的文章，楼主不妨一试。顺便提供一篇范文供楼主参考。 FASEB J. 2009 Aug;23(8):2576-86. Epub 2009 Mar 19. Cell-type specific activation of p38 and ERK mediates calcitonin gene-related peptide involvement in tolerance to morphine-induced analgesia. Wang Z, Ma W, Chabot JG, Quirion R. SourceDouglas Mental Health University Institute, 6875 Blvd. LaSalle, McGill University, Montreal, Quebec, Canada H4H 1R3. Abstract Tolerance to morphine-induced analgesia is a well-established phenomenon, often limiting its usefulness in the long-term treatment of pain. The mechanisms underlying tolerance are not well understood. We previously suggested a possible role for spinal calcitonin gene-related peptide (CGRP) in the development of tolerance to morphine-induced analgesia. In the present study, we demonstrate that CGRP is involved in morphine tolerance by differentially regulating the ERK-dependent up-regulation of IL-1beta, TNF-alpha, and microsomal prostaglandin E synthase-1 (mPGES-1) in astrocytes and p38-dependent up-regulation of IL-6 in microglia in the rat spinal cord. A 7-d treatment with morphine induced tolerance to the antinociceptive effect and increased phosphorylated ERK localized in astrocytes and phosphorylated p38 enriched in microglia, both effects being inhibited by blocking CGRP receptors. Interestingly, the inhibition of the ERK pathway suppressed the development of tolerance and morphine-induced up-regulation of IL-1beta, TNF-alpha, and mPGES-1. Blockade of p38 activity also inhibited the development of tolerance and morphine-induced IL-6 up-regulation. Taken together, these data suggest that chronic morphine induces the synthesis of CGRP, which in turn acts on CGRP receptors located on astrocytes and microglia to stimulate ERK and p38, respectively, leading to increased synthesis and release of proinflammatory mediators resulting in tolerance to morphine-induced analgesia.  |
2楼2012-11-30 17:12:26
henryxue
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 1
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 6043.7
- 红花: 1
- 帖子: 92
- 在线: 76.1小时
- 虫号: 2009319
- 注册: 2012-09-18
- 专业: 免疫生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
summer2771: 金币+4, ★有帮助, 谢谢您的回帖！说的也很详细！ 2012-12-01 01:05:33
感谢参与，应助指数 +1
summer2771: 金币+4, ★有帮助, 谢谢您的回帖！说的也很详细！ 2012-12-01 01:05:33
| 免疫荧光并不是不可以作为信号通路说明的方法，但是需要看合不合适。比如你的蛋白会在特定刺激下在胞内聚集、定位到特殊的细胞器、有入核出核的变化，免疫荧光是非常直观的说明手段，但是对于胞浆均匀分布的蛋白、对于衔接蛋白等等，这些用免疫荧光来说明就并不合适。另外，免疫荧光的抗体质量也是决定最后图片漂亮与否的关键因素之一。最后废话一句，实验室里有什么样的试剂、设备以及可行的方法和技术，才是决定你实验设计的关键，如果没有好用的抗体，荧光显微镜也不给力，做免疫荧光反而会画蛇添足。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
summer27713楼2012-11-30 22:35:24
summer2771
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 12266.9
- 散金: 118
- 红花: 4
- 帖子: 875
- 在线: 235.9小时
- 虫号: 680481
- 注册: 2008-12-23
- 专业: 细胞信号转导
4楼2012-12-01 01:06:51
henryxue
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 1
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 6043.7
- 红花: 1
- 帖子: 92
- 在线: 76.1小时
- 虫号: 2009319
- 注册: 2012-09-18
- 专业: 免疫生物学
|
红白肌肉在形态上或分布上是否能在光镜下明显区分？如果不能的话你在染你的蛋白同时还要加上区分这两种细胞的marker。另外先看看你的抗体的datasheet，看看适用于哪些实验，如果没有标明能做IHC、IF的话要当心抗体的假阴性和假阳性。话说用免疫荧光来定量可能不是很好的手段，亮度的差别可能不会很大的，而且要求定量的话对显微镜的要求是很高的。没有做过肌肉的经验，随意想到的一些东西供参考 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2012-12-01 12:06:13
summer2771
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 12266.9
- 散金: 118
- 红花: 4
- 帖子: 875
- 在线: 235.9小时
- 虫号: 680481
- 注册: 2008-12-23
- 专业: 细胞信号转导
6楼2012-12-01 19:08:41
