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yaxing2009

银虫 (小有名气)

[求助] 液相

问下大家 我在用液相测定样品的时候 经过条件摸索 最后确定了一个极性比较大的流动相,但是用这个流动相时我样品中含的一些极性小的物质不能出峰(样品爬板的时候出了个杂点),我现在想看看样品的的纯度,用了一个极性小的流动相,杂质和产品都能出峰,就是产品的保留时间很小,请问用这种方法看纯度可行吗?
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lhg0209asd

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


xiaoxiao270: 金币+1 2012-11-30 19:05:02
哇,你那仪器太牛了
试试这5个流动相吧:
1. 5%
2. 20%
3. 50%
4. 80%
5. 90%
每个流动相走20min即可(平衡冲柱时间另算),检测波长210nm
祝你好运
4楼2012-11-29 16:50:05
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lhg0209asd

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jiangchunyong: 金币+3, 谢谢 2012-11-29 18:29:02
以我的经验是不能的。如果想通过LC来确定:
1. 需要走一个全梯度的方法5%MeOH-100%MeOH 的梯度,如果HPLC需要60min分钟比较合理,UPLC 8min比较合理
2. 最好有DAD检测器,如果加一个MS那就更好了
3. 选择适当波长,如有双键的化合物都会在220nm下有吸收,无双键结构如三萜和长链、脂肪酸等基本无紫外吸收,只能用210nm,如果你使用254nm检测黄酮等类的物质,没有双键的三萜类和脂肪酸类的杂质根本检测不出来。
所以说使用HPLC检测纯度需要很丰富的经验。如果你有标准品只要操作误差控制在合理范围内那就简单多了
2楼2012-11-29 16:16:18
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yaxing2009

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhg0209asd at 2012-11-29 16:16:18
以我的经验是不能的。如果想通过LC来确定:
1. 需要走一个全梯度的方法5%MeOH-100%MeOH 的梯度,如果HPLC需要60min分钟比较合理,UPLC 8min比较合理
2. 最好有DAD检测器,如果加一个MS那就更好了
3. 选择适当波长 ...

现在的情况是没有标准品,我用公司的液相也比较旧,只有一个泵的那种,更没有DAD和MS了,手动梯度我试过,但是不好操作就放弃了,我用的是乙腈-水的流动相,各个梯度我都试过了,请教大侠我该咋整啊
3楼2012-11-29 16:30:47
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Malisa

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2012-11-30 19:05:06
那你就用两个流动相做呗!
一个看样品前面的杂质,一个看样品后面的杂质。然后把两个加起来。你可以参考美国药典加巴喷丁的样子,人家就是用的前后洗脱的方法。没有用梯度。乙腈-水的梯度很容易出鬼峰,如果检测波长低,噪音更大。而且做梯度起码要用一个梯度跑5遍以上的空白才能稳定下来做测定,所以不知道你有没有稳定够。不信你看看压力曲线就知道了。
5楼2012-11-30 13:30:58
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