24小时热门版块排行榜    

查看: 2587  |  回复: 25

fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-29 19:57:35
呵呵,做出来就好~恭喜一下哈~

O(∩_∩)O谢谢!
21楼2012-11-29 19:59:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fayzhao: 金币+1, 有帮助, O(∩_∩)O谢谢 2012-11-30 17:28:06
个人感觉没问题,一般的酶切位点正反都是一样的,对酶切应该没有啥影响!
22楼2012-11-29 22:12:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by fayzhao at 2012-11-29 19:52:26
补充:今天用通用引物做了菌液PCR,结果是单条带,说明我的克隆没有问题。
由于PCR扩增时3‘端会加一个A,连接的时候也是随机的,就会导致测序结果与目的基因序列反向互补。
我自己连了一下序列试了试,理论上来说 ...

感觉楼主挺明白的,没必要在这个问题上太纠结
23楼2012-11-29 22:15:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


fayzhao: 金币+1, 有帮助, O(∩_∩)O谢谢 2012-11-30 17:29:29
PCR片段AT克隆方向是随即的,如果有所加酶切位点,已经确定了方向,切下目的片段用于表达是没有问题。
24楼2012-11-30 04:40:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fayzhao: 金币+2, 有帮助 2012-11-30 17:42:39
我觉着楼主可能发错测序引物了,才导致每次测出来的都是反向,具体可以把另一份引物发出去,让他测一个看看会不会是正向结果。
不过,不管正反,只要连到载体上不影响目的基因的表达——具体看嘛就是正向那头是不是紧邻启动子。
不过PCR,P出多片段一定不要轻易进行下一步实验,道理很简单,分子实验本来就问题多多困难重重,万一出错可能要回溯好几个步骤寻找纰缪,所以尽可能保证每一步的规范、准确。这才是分子实验的重中之重。
25楼2012-11-30 11:06:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-30 11:06:10
我觉着楼主可能发错测序引物了,才导致每次测出来的都是反向,具体可以把另一份引物发出去,让他测一个看看会不会是正向结果。
不过,不管正反,只要连到载体上不影响目的基因的表达——具体看嘛就是正向那头是不是 ...

引物是用的通用引物,没有自己送引物过去。
我后面通用引物做的菌液PCR是单条带了,这个没问题了。只要连接反向没有问题就行了
26楼2012-11-30 17:42:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fayzhao 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭! 2026-03-15 12/600 2026-03-16 21:59 by 大米饭!
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[基金申请] 提交后的基金本子,已让学校撤回了,可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
请填处理意见