24小时热门版块排行榜    

查看: 2884  |  回复: 25

fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-29 19:57:35
呵呵,做出来就好~恭喜一下哈~

O(∩_∩)O谢谢!
21楼2012-11-29 19:59:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
fayzhao: 金币+1, 有帮助, O(∩_∩)O谢谢 2012-11-30 17:28:06
个人感觉没问题,一般的酶切位点正反都是一样的,对酶切应该没有啥影响!
22楼2012-11-29 22:12:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by fayzhao at 2012-11-29 19:52:26
补充:今天用通用引物做了菌液PCR,结果是单条带,说明我的克隆没有问题。
由于PCR扩增时3‘端会加一个A,连接的时候也是随机的,就会导致测序结果与目的基因序列反向互补。
我自己连了一下序列试了试,理论上来说 ...

感觉楼主挺明白的,没必要在这个问题上太纠结
23楼2012-11-29 22:15:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


fayzhao: 金币+1, 有帮助, O(∩_∩)O谢谢 2012-11-30 17:29:29
PCR片段AT克隆方向是随即的,如果有所加酶切位点,已经确定了方向,切下目的片段用于表达是没有问题。
24楼2012-11-30 04:40:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fayzhao: 金币+2, 有帮助 2012-11-30 17:42:39
我觉着楼主可能发错测序引物了,才导致每次测出来的都是反向,具体可以把另一份引物发出去,让他测一个看看会不会是正向结果。
不过,不管正反,只要连到载体上不影响目的基因的表达——具体看嘛就是正向那头是不是紧邻启动子。
不过PCR,P出多片段一定不要轻易进行下一步实验,道理很简单,分子实验本来就问题多多困难重重,万一出错可能要回溯好几个步骤寻找纰缪,所以尽可能保证每一步的规范、准确。这才是分子实验的重中之重。
25楼2012-11-30 11:06:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-30 11:06:10
我觉着楼主可能发错测序引物了,才导致每次测出来的都是反向,具体可以把另一份引物发出去,让他测一个看看会不会是正向结果。
不过,不管正反,只要连到载体上不影响目的基因的表达——具体看嘛就是正向那头是不是 ...

引物是用的通用引物,没有自己送引物过去。
我后面通用引物做的菌液PCR是单条带了,这个没问题了。只要连接反向没有问题就行了
26楼2012-11-30 17:42:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fayzhao 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 3/150 2026-08-07 21:49 by shalamu
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +8 且听虎啸 2026-08-07 11/550 2026-08-07 21:32 by 淞淞向上
[基金申请] 基金中了 +13 laoda193707 2026-08-06 13/650 2026-08-07 20:33 by tchen18
[基金申请] 关于filecode +3 布布和一二 2026-08-07 6/300 2026-08-07 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
信息提示
请填处理意见