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fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by bloodwar at 2012-11-29 04:58:24
反正你都有那么多阳性克隆了,有非特异性的就不用要了,否则到时双酶切还不知道会切成什么样

maker左右两侧是不同的基因,右侧的都是非特异性的……我打算用通用引物做个PCR,看看是不是单一条带
我本来打算重新做克隆的,但是一样的仪器一样的试剂一样的引物却扩不出条带了……郁闷中
11楼2012-11-29 09:17:49
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fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by chenguestc at 2012-11-29 08:57:27
多条带的直接扔掉,单挑带的保留可以后续试验

真的真的不行了吗?呜呜
这个多条带是不是切胶没有切好呀?
12楼2012-11-29 09:19:29
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by fayzhao at 2012-11-29 09:12:40
我在擎科测序的,不知道为什么是这样的结果……...

额。。。一般来说测序都是正常的呀,为什么要反向互补呢,你还价测序公司看看
13楼2012-11-29 10:42:43
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fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-29 10:42:43
额。。。一般来说测序都是正常的呀,为什么要反向互补呢,你还价测序公司看看...

是这样的,可能是因为我的下游引物开始也是A,导致连接的时候连接了另外一端吧……
14楼2012-11-29 19:27:03
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by fayzhao at 2012-11-29 19:27:03
是这样的,可能是因为我的下游引物开始也是A,导致连接的时候连接了另外一端吧……...

保佑哈
15楼2012-11-29 19:47:20
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fayzhao: 金币+2, 有帮助, 非常感谢,今天用通用引物做了菌落PCR,果然是单条带 2012-11-29 19:55:27
其实你的挺干净的了~尤其是测序结果对了就行了,你应该是做的TA克隆,方向是随机的~
双酶切下来如果是单条带就没问题了哦,而且以后你要做表达之前一样得测序的吧~
16楼2012-11-29 19:50:38
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fayzhao

金虫 (小有名气)

fayzhao: 回帖置顶 2012-11-29 19:55:59
补充:今天用通用引物做了菌液PCR,结果是单条带,说明我的克隆没有问题。
由于PCR扩增时3‘端会加一个A,连接的时候也是随机的,就会导致测序结果与目的基因序列反向互补。
我自己连了一下序列试了试,理论上来说后面双酶切之后是没有影响的,但是不知道实际上是不是这样哦,希望有经验的高手帮忙一下啦
17楼2012-11-29 19:52:26
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fayzhao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-29 19:47:20
保佑哈...

可能由于PCR扩增时3‘端会加一个A,连接的时候也是随机的,就会导致测序结果与目的基因序列反向互补。
希望不会出问题了……谢谢参与哦
18楼2012-11-29 19:53:25
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

呵呵,做出来就好~恭喜一下哈~
19楼2012-11-29 19:57:35
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fayzhao

金虫 (小有名气)

这个是今天用通用引物做的菌液PCR。

Administrator 2012-11-29 12hr 12min_副本.jpg

20楼2012-11-29 19:58:29
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