应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR多条带，还能往后做双酶切吗
262/3返回列表上一页123下一页
查看: 2480  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bloodwar at 2012-11-29 04:58:24
反正你都有那么多阳性克隆了，有非特异性的就不用要了，否则到时双酶切还不知道会切成什么样

maker左右两侧是不同的基因，右侧的都是非特异性的……我打算用通用引物做个PCR，看看是不是单一条带
我本来打算重新做克隆的，但是一样的仪器一样的试剂一样的引物却扩不出条带了……郁闷中
赞一下 回复此楼
11楼2012-11-29 09:17:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by chenguestc at 2012-11-29 08:57:27
多条带的直接扔掉，单挑带的保留可以后续试验

真的真的不行了吗？呜呜
这个多条带是不是切胶没有切好呀？
赞一下 回复此楼
12楼2012-11-29 09:19:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fayzhao at 2012-11-29 09:12:40
我在擎科测序的，不知道为什么是这样的结果……...

额。。。一般来说测序都是正常的呀，为什么要反向互补呢，你还价测序公司看看
赞一下 回复此楼
13楼2012-11-29 10:42:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-29 10:42:43
额。。。一般来说测序都是正常的呀，为什么要反向互补呢，你还价测序公司看看...

是这样的，可能是因为我的下游引物开始也是A，导致连接的时候连接了另外一端吧……
赞一下 回复此楼
14楼2012-11-29 19:27:03
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by fayzhao at 2012-11-29 19:27:03
是这样的，可能是因为我的下游引物开始也是A，导致连接的时候连接了另外一端吧……...

保佑哈
回复此楼
15楼2012-11-29 19:47:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fayzhao: 金币+2, ★有帮助, 非常感谢，今天用通用引物做了菌落PCR，果然是单条带 2012-11-29 19:55:27
其实你的挺干净的了~尤其是测序结果对了就行了，你应该是做的TA克隆，方向是随机的~
双酶切下来如果是单条带就没问题了哦，而且以后你要做表达之前一样得测序的吧~
赞一下 回复此楼
16楼2012-11-29 19:50:38
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
fayzhao: 回帖置顶 2012-11-29 19:55:59
补充：今天用通用引物做了菌液PCR，结果是单条带，说明我的克隆没有问题。
由于PCR扩增时3‘端会加一个A，连接的时候也是随机的，就会导致测序结果与目的基因序列反向互补。
我自己连了一下序列试了试，理论上来说后面双酶切之后是没有影响的，但是不知道实际上是不是这样哦，希望有经验的高手帮忙一下啦
赞一下 回复此楼
17楼2012-11-29 19:52:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-29 19:47:20
保佑哈...

可能由于PCR扩增时3‘端会加一个A，连接的时候也是随机的，就会导致测序结果与目的基因序列反向互补。
希望不会出问题了……谢谢参与哦
赞一下 回复此楼
18楼2012-11-29 19:53:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
呵呵，做出来就好~恭喜一下哈~
赞一下 回复此楼
19楼2012-11-29 19:57:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
这个是今天用通用引物做的菌液PCR。

Administrator 2012-11-29 12hr 12min_副本.jpg
赞一下 回复此楼
20楼2012-11-29 19:58:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fayzhao 的主题更新
262/3返回列表上一页123下一页
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭