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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取DNA出现弥散------求助
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素素2008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-27 14:35:09
得看你RNA酶的浓度哈~你这个DNA浓度倒是也能做PCR

哦哦，谢谢！
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11楼2012-11-29 18:38:09
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素素2008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-27 16:05:11
浓度太低了，有污染或降解了。

哦。那我再尝试尝试！谢谢
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12楼2012-11-29 18:38:32
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素素2008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-27 18:44:03
这个浓度RNA酶也足够了啊~稀释个十倍五十倍做PCR试试吧~...

虫友说的稀释，指的是稀释什么？DNA还是RNA酶？
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13楼2012-11-29 18:39:32
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 素素2008 at 2012-11-29 18:39:32
虫友说的稀释，指的是稀释什么？DNA还是RNA酶？...

稀释基因组模板啊~我们一般都会把抽提到的基因组DNA模板稀释十倍以上才拿来做PCR的啊~你把抽提到的DNA直接加进去PCR往往会影响你的taq酶活性的
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14楼2012-11-29 19:44:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 素素2008 at 2012-11-29 18:37:34
我做的是真核藻，我没有专门破碎细胞的步骤，只是加了些CTAB裂解液温育。老师说，这就算是破碎细胞的过程了。还说藻细胞很容易破裂的。请问虫友，你用的什么方法破碎的？我们是初做，一直在摸索，但效果很不好，不 ...

裂解细胞的方法很多。CTAB是一种常用的。如果有些细胞不好裂解的话，可以加辅助SDS裂解。你做的藻含有一些色素吧。如果裂解不好的话，用酚：氯仿抽提离心后机相中颜色浅，未破碎藻细胞会沉在下面，中间白色蛋白层很不明显。裂解好的样品水相有一点点非常浅的颜色，有机相颜色深，中间有明显蛋白层，下面没有明显的未破碎的藻细胞。
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素素2008
15楼2012-11-30 06:36:18
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素素2008

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-30 06:36:18
裂解细胞的方法很多。CTAB是一种常用的。如果有些细胞不好裂解的话，可以加辅助SDS裂解。你做的藻含有一些色素吧。如果裂解不好的话，用酚：氯仿抽提离心后机相中颜色浅，未破碎藻细胞会沉在下面，中间白色蛋白层很 ...

哦，我做时，感觉也有明显的蛋白层。但是，即使提高藻液用量，DNA浓度始终不高，我同学用的另一种藻细胞，同样的方法，浓度就有一百多。她帮我做，浓度也是很低。不知道是不是和材料有关。我的藻是硅藻中的角毛藻，有很多支支叉叉的角毛，每次离心时，14000rpm，10min，都很难很好的贴壁。所以，总是觉得去海水，去的不干净。有盐污染。但是离心转速已经很大了。不知道虫友有什么好方法提供没？谢谢啦！
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16楼2012-11-30 17:02:07
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素素2008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-29 19:44:52
稀释基因组模板啊~我们一般都会把抽提到的基因组DNA模板稀释十倍以上才拿来做PCR的啊~你把抽提到的DNA直接加进去PCR往往会影响你的taq酶活性的...

哦哦，不过，虫友，我提取的DNA浓度本来就比较低了。只有十几ng/ul，所以，要是稀释十倍，就更低了。感觉没法再稀释了。
不知道虫友做的，浓度大概有多少？
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17楼2012-11-30 17:04:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
素素2008: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-05 20:27:10
引用回帖:
16楼: Originally posted by 素素2008 at 2012-11-30 17:02:07
哦，我做时，感觉也有明显的蛋白层。但是，即使提高藻液用量，DNA浓度始终不高，我同学用的另一种藻细胞，同样的方法，浓度就有一百多。她帮我做，浓度也是很低。不知道是不是和材料有关。我的藻是硅藻中的角毛藻， ...

裂解细胞前先用缓冲液洗几次，应该可以除去原培养液的成分，而且能把细胞外面洗干净，对裂解有一定帮助。
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18楼2012-12-01 08:03:48
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by 素素2008 at 2012-11-30 17:04:51
哦哦，不过，虫友，我提取的DNA浓度本来就比较低了。只有十几ng/ul，所以，要是稀释十倍，就更低了。感觉没法再稀释了。
不知道虫友做的，浓度大概有多少？...

要相信taq酶的能力，DNA多了才是真的扩增不出来……
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19楼2012-12-01 13:38:51
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素素2008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-12-01 13:38:51
要相信taq酶的能力，DNA多了才是真的扩增不出来……...

哦哦，谢谢，我再试试
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20楼2012-12-05 20:26:25
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