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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » BCA检测蛋白浓度负值怎么回事
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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happyzxj718

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] BCA检测蛋白浓度负值怎么回事

虫虫们，最近用BCA试剂盒检测溶液内蛋白含量，蛋白浓度应该很低，计算后浓度是负数呢，什么意思呀，求指点。急呀。
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1楼 2012-11-25 21:08:15
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禁虫

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
happyzxj718: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-11-30 10:47:56
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-12-01 05:28:29
引用回帖:
13楼: Originally posted by happyzxj718 at 2012-11-28 08:17:45
能不能详细指点一下呢，我是用的BCA 试剂盒，标曲的截距是公式给定的呀，一般在0.1左右。标准曲线绘制出来后，发现几个点偏离了曲线，蛋白标准液共八个点，可不可以去掉一两个变异点呢...

这3条曲线都是直线，是Y=aX+b，b是截距，要计算出X值含量，就应该将测定值Y先减去截距b，当b太大就会产生负值，所以如果曲线制作得不好就必须重做，你看看我的这3条，截距都不同的，但只有一条合适使用，而且你的相关系数才0.96，你看我的都是0.99以上的，我还要做3次才得到可信的，你就更应该重做了。

BCA1.jpg



BCA2.jpg



BCA3.jpg
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2012-11-28 09:39:52
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cicelyzh

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-11-26 07:10:47
你是否做了样品buffer的对照？buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的负值不是很大的情况下，你可以直接测定含有同样量的buffer下的吸光值（假定为负），然后用测定样品的吸光值扣除这个负对照，然后再根据标准曲线计算。或者，你也可以把做标准曲线的BSA的样品也加入同样量的buffer。祝你好运！
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2楼2012-11-26 05:37:02
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weigh1111

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你用的标准曲线或者参比不太对哦……要是你参比用错了的话，比如参比有挺高的吸收的话，会拉低你的样品吸光度，算出来就可能是负值
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3楼2012-11-26 08:18:00
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happyzxj718

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-26 05:37:02
你是否做了样品buffer的对照？buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的负值不是很大的情况下，你可以直接测定含有同样量的buffer下的吸光值（假定为负），然后用测定样品的吸光值扣除这个负对照，然后再根 ...

谢谢你的回复。我用的碧云天的试剂盒，按照说明书步骤来做的，标曲R2在0.96左右。蛋白浓度低会不会出现负值这种情况呢
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I LIKE MY WORK
4楼2012-11-26 19:22:19
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