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happyzxj718

新虫 (初入文坛)

[求助] BCA检测蛋白浓度负值怎么回事

虫虫们,最近用BCA试剂盒检测溶液内蛋白含量,蛋白浓度应该很低,计算后浓度是负数呢,什么意思呀,求指点。急呀。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
happyzxj718: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-11-30 10:47:56
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-12-01 05:28:29
引用回帖:
13楼: Originally posted by happyzxj718 at 2012-11-28 08:17:45
能不能详细指点一下呢,我是用的BCA 试剂盒,标曲的截距是公式给定的呀,一般在0.1左右。标准曲线绘制出来后,发现几个点偏离了曲线,蛋白标准液共八个点,可不可以去掉一两个变异点呢...

这3条曲线都是直线,是Y=aX+b,b是截距,要计算出X值含量,就应该将测定值Y先减去截距b,当b太大就会产生负值,所以如果曲线制作得不好就必须重做,你看看我的这3条,截距都不同的,但只有一条合适使用,而且你的相关系数才0.96,你看我的都是0.99以上的,我还要做3次才得到可信的,你就更应该重做了。

BCA1.jpg



BCA2.jpg



BCA3.jpg

流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2012-11-28 09:39:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-11-26 07:10:47
你是否做了样品buffer的对照?buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的负值不是很大的情况下,你可以直接测定含有同样量的buffer下的吸光值(假定为负),然后用测定样品的吸光值扣除这个负对照,然后再根据标准曲线计算。或者,你也可以把做标准曲线的BSA的样品也加入同样量的buffer。祝你好运!
2楼2012-11-26 05:37:02
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是你用的标准曲线或者参比不太对哦……要是你参比用错了的话,比如参比有挺高的吸收的话,会拉低你的样品吸光度,算出来就可能是负值
3楼2012-11-26 08:18:00
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happyzxj718

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-26 05:37:02
你是否做了样品buffer的对照?buffer里有些成分可能造成吸光值下降。如果buffer的负值不是很大的情况下,你可以直接测定含有同样量的buffer下的吸光值(假定为负),然后用测定样品的吸光值扣除这个负对照,然后再根 ...

谢谢你的回复。我用的碧云天的试剂盒,按照说明书步骤来做的,标曲R2在0.96左右。蛋白浓度低会不会出现负值这种情况呢
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4楼2012-11-26 19:22:19
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