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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白保护剂
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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白保护剂

大家好。我最近在做包涵体的纯化，先是洗涤包涵体，碱变性，然后透析复性，由于目的蛋白含有12个二硫键，在复性时先加入DTT, 在出去多余的DTT，然后加入氧化型和还原型谷胱甘肽，最后出去多余的谷胱甘肽。透析结束时，无明显可见沉淀，直接用Ttris做为蛋白液，-20度保存，五天后，重新冻融，发现有明显的沉淀。请教大家，是否应该在蛋白液中加入蛋白保护剂？加入什么保护剂比较好，浓度时多少？谢谢大家，急求。
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1楼 2012-11-22 13:54:48
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
consist10: 金币+5 2012-11-26 10:02:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-11-22 21:15:26
tcep和DOC是什么试剂，有什么作用？请问是不是也可以加0.3M的L-精氨酸呢？谢谢...

TCEP HCl也是一种还原剂，类似DTT，不过效果比DTT好。
DOC是脱氧胆酸盐，帮助蛋白正确折叠，保护蛋白不致变性的保护剂。
L-精氨酸没添加过，不好说。
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4楼2012-11-23 09:45:27
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以冻存buffer中加10%甘油，补上5mM的tcep，在你的包涵体处理过程加0.1%的DOC。
试试
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2楼2012-11-22 17:22:11
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consist10

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-11-22 17:22:11
可以冻存buffer中加10%甘油，补上5mM的tcep，在你的包涵体处理过程加0.1%的DOC。
试试

tcep和DOC是什么试剂，有什么作用？请问是不是也可以加0.3M的L-精氨酸呢？谢谢
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3楼2012-11-22 21:15:26
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