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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白保护剂

大家好。我最近在做包涵体的纯化,先是洗涤包涵体,碱变性,然后透析复性,由于目的蛋白含有12个二硫键,在复性时先加入DTT, 在出去多余的DTT,然后加入氧化型和还原型谷胱甘肽,最后出去多余的谷胱甘肽。透析结束时,无明显可见沉淀,直接用Ttris做为蛋白液,-20度保存,五天后,重新冻融,发现有明显的沉淀。请教大家,是否应该在蛋白液中加入蛋白保护剂?加入什么保护剂比较好,浓度时多少?谢谢大家,急求。
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以冻存buffer中加10%甘油,补上5mM的tcep,在你的包涵体处理过程加0.1%的DOC。
试试
2楼2012-11-22 17:22:11
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consist10

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-11-22 17:22:11
可以冻存buffer中加10%甘油,补上5mM的tcep,在你的包涵体处理过程加0.1%的DOC。
试试

tcep和DOC是什么试剂,有什么作用?请问是不是也可以加0.3M的L-精氨酸呢?谢谢
3楼2012-11-22 21:15:26
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
consist10: 金币+5 2012-11-26 10:02:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-11-22 21:15:26
tcep和DOC是什么试剂,有什么作用?请问是不是也可以加0.3M的L-精氨酸呢?谢谢...

TCEP HCl也是一种还原剂,类似DTT,不过效果比DTT好。
DOC是脱氧胆酸盐,帮助蛋白正确折叠,保护蛋白不致变性的保护剂。
L-精氨酸没添加过,不好说。
4楼2012-11-23 09:45:27
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