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aoda123

木虫 (正式写手)

[求助] 膜蛋白表达 已有1人参与

最近在诱导表达一种膜蛋白,但表达后条带比理论值大,是不是由于形成同聚物没有散开成单体?
  各位虫虫有没有这方面经验呢?
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身体健康,工作顺利
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你说的表达后条带是指电泳结果还是纯化后FPLC的结果?PAGE中膜蛋白表观分子量比理论值大很常见。因为膜蛋白经SDS变性不如可溶蛋白完全,形状不规则。
2楼2012-11-21 07:49:07
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aoda123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-21 07:49:07
你说的表达后条带是指电泳结果还是纯化后FPLC的结果?PAGE中膜蛋白表观分子量比理论值大很常见。因为膜蛋白经SDS变性不如可溶蛋白完全,形状不规则。

是诱导后的菌液处理后的电泳结果,还没有纯化。如果纯化之后,大小会跟理论值接近吗?
身体健康,工作顺利
3楼2012-11-21 13:10:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by aoda123 at 2012-11-21 13:10:29
是诱导后的菌液处理后的电泳结果,还没有纯化。如果纯化之后,大小会跟理论值接近吗?...

电泳靠蛋白marker估算分子量只是电泳表观分子量,和理论值有出入很正常,这和纯化不纯化没有关系。蛋白真正的分子量需要用更精确的手段测定。
4楼2012-11-21 15:15:28
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鸣人小茄子

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你好。请问你做的膜蛋白表达是什么载体和菌株呢?诱导条件是什么?我最近在做,可是一直都表达不了
Nothing is impossible!
5楼2014-04-16 15:02:22
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aoda123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鸣人小茄子 at 2014-04-16 09:02:22
你好。请问你做的膜蛋白表达是什么载体和菌株呢?诱导条件是什么?我最近在做,可是一直都表达不了

我们构建的载体中在目的蛋白前端加了一段sumo蛋白,促进融合表达。表达菌可以选用C41或者C43
身体健康,工作顺利
6楼2014-04-16 19:43:52
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