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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 膜蛋白表达
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aoda123

木虫 (正式写手)

[求助] 膜蛋白表达 已有1人参与

最近在诱导表达一种膜蛋白，但表达后条带比理论值大，是不是由于形成同聚物没有散开成单体？
  各位虫虫有没有这方面经验呢？
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身体健康，工作顺利
1楼 2012-11-20 15:11:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的表达后条带是指电泳结果还是纯化后FPLC的结果？PAGE中膜蛋白表观分子量比理论值大很常见。因为膜蛋白经SDS变性不如可溶蛋白完全，形状不规则。
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2楼2012-11-21 07:49:07
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-21 07:49:07
你说的表达后条带是指电泳结果还是纯化后FPLC的结果？PAGE中膜蛋白表观分子量比理论值大很常见。因为膜蛋白经SDS变性不如可溶蛋白完全，形状不规则。

是诱导后的菌液处理后的电泳结果，还没有纯化。如果纯化之后，大小会跟理论值接近吗？
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身体健康，工作顺利
3楼2012-11-21 13:10:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by aoda123 at 2012-11-21 13:10:29
是诱导后的菌液处理后的电泳结果，还没有纯化。如果纯化之后，大小会跟理论值接近吗？...

电泳靠蛋白marker估算分子量只是电泳表观分子量，和理论值有出入很正常，这和纯化不纯化没有关系。蛋白真正的分子量需要用更精确的手段测定。
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4楼2012-11-21 15:15:28
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鸣人小茄子

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你好。请问你做的膜蛋白表达是什么载体和菌株呢？诱导条件是什么？我最近在做，可是一直都表达不了
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Nothing is impossible!
5楼2014-04-16 15:02:22
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 鸣人小茄子 at 2014-04-16 09:02:22
你好。请问你做的膜蛋白表达是什么载体和菌株呢？诱导条件是什么？我最近在做，可是一直都表达不了

我们构建的载体中在目的蛋白前端加了一段sumo蛋白，促进融合表达。表达菌可以选用C41或者C43
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身体健康，工作顺利
6楼2014-04-16 19:43:52
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