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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 扩增基因CDS区域如何设计引物?

请问欲扩增基因CDS区域然后连接载体转染入细胞内表达,引物如何设计?我看到有人说上游引物在起始密码子前照抄20个左右,这是什么意思啊 ?
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lvanmorison at 2012-11-23 21:00:01
比如MYOD1基因,我首先在NCBI找到它的mRNA序列,然后找到它的CDS序列,全部复制下来,在primer 5.0 中,正向引物直接从CDS的第一个核酸开始(比如18bp),反向引物从CDS最后一个核酸开始,向前选择序列(比如17bp) ...

DNA是双链的,所谓上游引物和下游引物,是以其中一条链为基准说的,是不是以另外一条链为基准的话上游和下游的说法就要颠倒过来了呢?我提总RNA然后用试剂盒反转录成cDNA,用cDNA作为模板扩增基因的CDS区,那么我的模板到底是与mRNA序列相同还是互补呢?还是不必区分,反正两条链都要扩增出来!急求回答,多谢了
18楼2012-11-25 16:56:53
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

谁能帮帮我啊?愿意赠送金币
3楼2012-11-18 21:45:18
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

照抄后又想输入到PRIMER 5中检验,那粘贴时直接粘呢?还是选择反过来呢?
4楼2012-11-18 21:56:26
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

谁能帮帮我啊??????、、、、
5楼2012-11-22 22:28:29
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