24小时热门版块排行榜    

查看: 1108  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qianxun24

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助高手指点有关基因敲除

我目前在做基因敲除,是有关II型内含子插入失活的,现在做到验证这一步,但是一直验证不出到底有没有插入失活,我是用一种抗生素筛选,按理说在这种抗生素上能长出来的就应该有插入失活的(即,被敲除的),但是挑了40多个菌,菌落PCR验证后都没有PCR出现我要的片段(其实是核酸电泳后没有出现任何条带),我是想问,一般敲除是要挑很多单菌落验证吗?还有没有其他比较好的验证方法,跪求指点。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianxun24

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-11-23 17:22:23
你PCR带了阳性对照没?看看阳性对照有没有P出来
还有就是菌落PCR能够扩增的长度有限,好像2K以上的片段用菌落PCR就有点悬了,倒不如提取基因组DNA来PCR试试

阳性对照是1300bp的片段,每次都能P出来,目标片段是900bp,菌落PCR我估计做了200多个了,目前还是P不出来。我用的是红霉素筛选插入失活的,按理活插入了才能在红霉素抗性上长出来,有没有可能是插入到其它片段了呢?
4楼2012-11-24 09:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

1514132

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
qianxun24: 金币+5, 有帮助 2012-11-24 09:20:58
建议你做一下表达量的区分,比如半定量

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-11-23 16:08:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
qianxun24: 金币+5, 有帮助 2012-11-24 09:13:24
你PCR带了阳性对照没?看看阳性对照有没有P出来
还有就是菌落PCR能够扩增的长度有限,好像2K以上的片段用菌落PCR就有点悬了,倒不如提取基因组DNA来PCR试试

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-11-23 17:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qianxun24

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 1514132 at 2012-11-23 16:08:03
建议你做一下表达量的区分,比如半定量

什么是表达量的区分,我是个新手,对这块还不是太熟悉,能跟我详细说下嘛,不胜感激!
5楼2012-11-24 09:20:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见