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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建基因文库（sauA酶切后胶回收 效率低 该怎么办
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mqs123

金虫 (初入文坛)
觉得你的基因组浓度有些低，先提高基因组的量，酶切后条带是分散的一大片，需要你你胶回收的时候多回收几管，一个柱子的洗脱液在洗下一管，我是6管胶回收的柱子，最终加了60UL的水，条带挺亮的。
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11楼2012-11-19 21:21:04
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:21:04
觉得你的基因组浓度有些低，先提高基因组的量，酶切后条带是分散的一大片，需要你你胶回收的时候多回收几管，一个柱子的洗脱液在洗下一管，我是6管胶回收的柱子，最终加了60UL的水，条带挺亮的。

你是用六个柱子回收胶的吗？一个柱子的洗脱液再洗下一个柱子？你不完全酶切总共切了多少ug的基因组，才够建库的？
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nothing isimpossible
12楼2012-11-20 12:07:09
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:21:04
觉得你的基因组浓度有些低，先提高基因组的量，酶切后条带是分散的一大片，需要你你胶回收的时候多回收几管，一个柱子的洗脱液在洗下一管，我是6管胶回收的柱子，最终加了60UL的水，条带挺亮的。

135916906，这是我们几个刚开始建库的童鞋建的一个群，想邀请您加入，能帮我们解决一些问题吗？
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nothing isimpossible
13楼2012-11-20 12:08:52
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mqs123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

4ug/UL,酶切体系是：
30UL: 加入DNA10ul，三管一组，我一般做2-3组.
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14楼2012-11-22 13:57:46
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:21:04
觉得你的基因组浓度有些低，先提高基因组的量，酶切后条带是分散的一大片，需要你你胶回收的时候多回收几管，一个柱子的洗脱液在洗下一管，我是6管胶回收的柱子，最终加了60UL的水，条带挺亮的。

请问你跑胶时用的配胶板长度是6cm的，还是12cm的？我觉得我用6cm的跑不开（如上图），12cm的跑的太开了，以至于最后回收的时胶的体积过大，回收效率不高啊！
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nothing isimpossible
15楼2012-12-05 22:02:13
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