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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC不出峰
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cj22xmc

新虫 (正式写手)

[求助] HPLC不出峰

HPLC不出峰。样品在205nm有最大吸收，进样后不出峰，流动相用甲醇和水不同比例试过，乙腈和水不同比例也试过；柱子为新柱子，不接柱子也不出峰；氘灯为新的；测其他物质有峰（改变了波长），已经进了多针，都未见出峰，也未见压力上升，是啥原因？望高手指导！
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mc
1楼 2012-11-16 17:49:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mxx7456

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基线正常吗，加大浓度试试看呢
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2楼2012-11-16 17:56:23
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longsmile

木虫 (正式写手)
加浓度看看  换样品的批次
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3楼2012-11-16 19:46:38
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wangfei.ac

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是碱性物质倒有可能，峰会很宽，难以察觉，要比正常的样品进样浓度加大数倍方可出峰，在分析天然产物生物碱类成分时这种情况时有出现。
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4楼2012-11-16 20:16:09
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zhgjsyzhyang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不接柱子都不出峰，进样浓度大约25ug/ml,改变进样体积没有变化，考虑下样品的溶解和稳定性吧
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9楼2012-11-19 10:59:46
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喵喵与咩咩

铁杆木虫 (著名写手)

要把生活过成诗和远方

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不出峰的原因有很多种：1.如果你是中药材的话有可能提取方法不对，样品溶液浓度很小，达不到检测限
                       2.你的药物比较特殊，单纯的水和有机相不出峰，这时候你可以考虑加入少量缓冲盐，考虑到你的检测波长很低，建议加入0.05%的磷酸（注意测试一下PH,不要超过柱子的承受范围）；如果再不行就加缓冲盐
                     
另外的话，建议你多查一下文献，多思考原因。药物的性质如何，现在有哪些文献
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生命不息，奋斗不止
10楼2012-11-19 12:40:00
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普通回帖

lzh0260

金虫 (小有名气)
好小的波长  处于末端了
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行动创造结果
5楼2012-11-16 23:13:09
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cj22xmc

新虫 (正式写手)
进样浓度大约25ug/ml,改变进样体积没有变化。换过不同批次样品进样，且样品在紫外205nm下吸光度有1.2.基线有较小不规则波动。
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mc
6楼2012-11-17 09:16:12
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佟智慧85

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
205nm，甲醇，乙腈的末端吸收导致的吧，背景干扰，是不是可以选择换别的方法
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7楼2012-11-17 09:23:27
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cj22xmc

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 佟智慧85 at 2012-11-17 09:23:27
205nm，甲醇，乙腈的末端吸收导致的吧，背景干扰，是不是可以选择换别的方法

205nm是药典检测波长，且也是用甲醇和乙腈为有机相（还有水相，梯度洗脱）。干扰会有这么严重吗，影响到不出峰？
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mc
8楼2012-11-17 09:31:57
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