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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 锦葵科植物RNA提取，请各位帮忙！
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fly-xu

银虫 (初入文坛)

[求助] 锦葵科植物RNA提取，请各位帮忙！

最近一直在提黄秋葵的RNA,很多多糖杂质，提的时候各种黏糊糊的，各位有人曾经提过的吗？介绍下多糖植物的提取经验吧！万分感谢！上两张图大家给我分析分析吧！
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    • 2012-11-14 19:51:42, 437.7 K
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    • 2012-11-14 19:51:51, 437.7 K

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1楼 2012-11-14 19:52:29
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fly-xu: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢！请问您第二种方法醋酸钠和乙醇的浓度是多少呢？ 2012-11-15 09:38:19
我也提RNA，多糖的的物种比较难弄。方法一，用负八十冰冷的丙酮抽提两次。方法二，加十分之一体积的醋酸钠和十分之一乙醇沉淀多糖。方法三，用裂解液抽提两次。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
2楼2012-11-14 21:29:37
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quintas

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fly-xu: 金币+2, ★★★很有帮助, 多谢！ 2012-11-15 09:39:06
建议用柠檬酸钠抽提，除多糖的效果很好，但是因为结合紧密导致微小RNA损失严重，但是能保证纯度。
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3楼2012-11-14 23:01:14
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fly-xu

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by quintas at 2012-11-14 23:01:14
建议用柠檬酸钠抽提，除多糖的效果很好，但是因为结合紧密导致微小RNA损失严重，但是能保证纯度。

请问您用的柠檬酸钠浓度是多少呢？我用的是CTAB法，不知道是在那步用柠檬酸钠呢？
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4楼2012-11-15 09:41:26
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quintas

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fly-xu at 2012-11-15 09:41:26
请问您用的柠檬酸钠浓度是多少呢？我用的是CTAB法，不知道是在那步用柠檬酸钠呢？...

向裂解液里加氯仿后，抽提水相RNA，水相中加异丙醇，静置离心前+盐溶液。
盐溶液：0.8m 柠檬酸钠+1.2m NaCl。
另外，异硫氰酸胍-氯仿抽提、Tris饱和酚纯化植物RNA的抽提方法是最适合从富含多糖多酚及次生代谢物质的植物组织中提取总RNA的方法。供参考。
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5楼2012-11-15 18:02:03
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shucanwei

木虫 (正式写手)
A simple and rapid method for RNA isolation from plant tissues with high phenolic compounds and polysaccharides。
请参考这篇文章，nature的文章，效果很好。
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
6楼2012-11-16 00:24:03
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shucanwei

木虫 (正式写手)
我有原文，但不知道怎么传给你。
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
7楼2012-11-16 00:24:27
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xudabin98

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by shucanwei at 2012-11-16 00:24:27
我有原文，但不知道怎么传给你。

这个方法不是很好，我试过。后来用了一种新的方法，效果比这个好多了。
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8楼2012-11-16 18:32:36
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xudabin98

木虫 (正式写手)
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5191776&fpage=1看看这个帖子
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9楼2012-11-16 19:01:11
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fly-xu

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by quintas at 2012-11-15 18:02:03
向裂解液里加氯仿后，抽提水相RNA，水相中加异丙醇，静置离心前+盐溶液。
盐溶液：0.8m 柠檬酸钠+1.2m NaCl。
另外，异硫氰酸胍-氯仿抽提、Tris饱和酚纯化植物RNA的抽提方法是最适合从富含多糖多酚及次生代谢物质 ...

多谢！
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10楼2012-11-18 18:38:00
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