| 查看: 1426 | 回复: 6 | ||
sunbeartao新虫 (小有名气)
|
[求助]
3Kbp片段转化连接问题
|
| 请各位师兄师姐帮忙：三千左右的片段用LA TAQ从模板扩增得到，胶回收后跑胶验证，比较亮的。连接TAKARA的PMD 19-T SIMPLE，体系是solution 5 ul, 载体1ul，片段4.5ul,连接9小时左右，涂板（氨苄），长14小时左右，十个菌落左右，跑菌落PCR没有条带（一条也没有），拿去测序却是1500左右的片段。现在在做第二次，菌落PCR还是没有。提质粒酶切这里不太试用（载体大小和片段差不多，一个是2700，一个2900）。请教各位大师。ps 平板刚倒的，连接酶和感受态JM109没问题（师姐能做出来） |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有258人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2012-11-15 09:08:58
sunbeartao
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 13.4
- 帖子: 124
- 在线: 25.3小时
- 虫号: 1634309
- 注册: 2012-02-22
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
3楼2012-11-15 13:24:11
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
sunbeartao: 金币+10, ★有帮助 2012-12-11 12:50:54
sunbeartao: 金币+15 2013-01-01 22:30:51
sunbeartao: 金币+10, ★有帮助 2012-12-11 12:50:54
sunbeartao: 金币+15 2013-01-01 22:30:51
|
不做酶切的话质粒有三种形式，用盒子提的基本都是超螺旋形式，电泳跑得比线性分子（marker）中同样分子量的带要快，所以不容易判断大小。后面半句的意思是你把构建好的载体序列做一下酶切位点分析，找一下只存在于目的基因里（空载体没有）的酶，然后做下酶切。如果能切动的话说明构建载体里含有目的片段。再加上前面说的单酶切判断质粒大小，这样做比较保险。 |
4楼2012-11-15 13:46:24
sunbeartao
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 13.4
- 帖子: 124
- 在线: 25.3小时
- 虫号: 1634309
- 注册: 2012-02-22
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
5楼2012-11-15 14:36:12
乐乐3952
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 36 (小学生)
- 金币: 6215.1
- 散金: 6
- 红花: 3
- 沙发: 2
- 帖子: 711
- 在线: 134.1小时
- 虫号: 1005597
- 注册: 2010-04-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
6楼2012-11-15 15:28:00
sunbeartao
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 13.4
- 帖子: 124
- 在线: 25.3小时
- 虫号: 1634309
- 注册: 2012-02-22
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
7楼2012-11-15 19:37:32
10