24小时热门版块排行榜    

查看: 2058  |  回复: 31
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 亲们,你们做定点突变么?

最近在做定点突变,用的trans的定点突变的试剂盒,但是就是没有条带,我是希望在病毒基因组全场位置上突变两个碱基,有做过的人,能稍微知道下么,病毒基因组加上质粒载体一共12k,trans公司的人说可能是由于模板比较大的原因,你们做定点突变都是怎么做的,有什么经验能分享么,每次PCR都是P不出来,快郁闷死了。。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangtaodluf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
片段太长的话一是不好P出来,二是保真上也不好说。可以尝试用OVERLAP PCR来做定点突变。
8楼2012-11-13 08:43:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 32 个回答

liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议在T载体上突变好了再连目标载体,载体太大了,PCR不大容易
2楼2012-11-11 11:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

polepolar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 编辑内容 2013-05-29 19:30
确实是因为模板太大的原因,现有的聚合酶扩增不了这么大的片段,建议交给公司做吧

[ Last edited by gyesang on 2013-5-29 at 19:30 ]
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
3楼2012-11-12 14:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuan6126 at 2012-11-11 11:14:58
建议在T载体上突变好了再连目标载体,载体太大了,PCR不大容易

在T载体上做好突变?这样子是不是比较容易?你之前有做过么,有成功的例子没?
4楼2012-11-12 15:54:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境调剂 +4 chenhanheng 2026-03-02 4/200 2026-03-02 20:23 by hypershenger
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +4 gaoxiaoniuma 2026-02-28 5/250 2026-03-02 19:33 by Xinyuu
[考研] 化工270求调剂 +9 什么名字qwq 2026-03-02 9/450 2026-03-02 19:31 by caszguilin
[考研] 0856调剂 +8 刘梦微 2026-02-28 8/400 2026-03-02 19:23 by caszguilin
[考博] 26超级电容器申博 +3 dhdjdjend 2026-02-25 3/150 2026-03-02 19:21 by 轻松不少随
[考研] 283求调剂 +5 鹿沫笙 2026-03-02 5/250 2026-03-02 19:19 by zhukairuo
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+6 vida_a 2026-03-01 16/800 2026-03-02 19:13 by zhukairuo
[考研] 一志愿中石油(华东)本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:54 by caszguilin
[考研] 282求调剂 +4 2103240126 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:07 by 2103240126
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分,求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 0856化工专硕求调剂 +15 董boxing 2026-03-01 15/750 2026-03-02 15:06 by 晃晃不许晃
[考研] 276求调剂 +4 路lyh123 2026-02-28 5/250 2026-03-02 11:20 by yuchj
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+4 ,!? 2026-03-02 6/300 2026-03-02 11:07 by 黑!在干嘛
[考研] 材料调剂 +6 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:42 by Jy?
[考研] 0856材料调剂 +4 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:19 by 公瑾逍遥
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
信息提示
请填处理意见