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青苹果QT

金虫 (小有名气)

[求助] LR反应

有没有做LR反应的呀？
为什么电击时会爆？！三个杯子同样的操作，为什么会有一个爆了
而且把爆了的那个同样的操作，长出来几个菌落
求解！
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1楼 2012-11-10 16:19:52
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hchen82

禁虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-28 13:58:07
本帖内容被屏蔽
2楼2012-11-28 10:44:56
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青苹果QT

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hchen82 at 2012-11-28 10:44:56
三个杯子 都是转同样的样品么（这个真没必要）
离子浓度可能高了，样品不是很纯，DNA加多了，有时杯子老化……
重新长出来的几个菌落有可能阴性的，不过可以摇一下……（一般爆杯之后，就扔掉重做）

三个杯子不是同一个样品，是做两个样品，爆了一个，然后又重新组了哪一个。离子浓度高的意思是说杯子没有洗干净吗？？三个杯子一起洗的，洗了四五遍。。。。质粒是稀释100倍之后加的，长出的菌PCR死阳性的。
关键是最近做了三次都会爆一个，师兄师姐说他们做了这么多次也就爆股一两次。。。。苦恼啊
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3楼2012-11-28 12:51:58
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青苹果QT

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hchen82 at 2012-11-28 10:44:56
三个杯子 都是转同样的样品么（这个真没必要）
离子浓度可能高了，样品不是很纯，DNA加多了，有时杯子老化……
重新长出来的几个菌落有可能阴性的，不过可以摇一下……（一般爆杯之后，就扔掉重做）

三个杯子不是同一个样品，是做两个样品，爆了一个，然后又重新做了那一个。离子浓度高的意思是说杯子没有洗干净吗？？三个杯子一起洗的，洗了四五遍。。。。质粒是稀释100倍之后加的，长出的菌PCR是阳性的。
关键是最近做了三次都会爆一个，师兄师姐说他们做了这么多次也就爆过一两次。。。。苦恼啊
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4楼2012-11-28 12:53:13
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

通常采用化学法制备的感受态，可以用热击法转化。
电击感受态要求控制离子浓度，太麻烦了
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5楼2012-12-06 17:05:00
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

方法可以参见Inoue法制备感受态，相应的转化方法在分子克隆第三版上都有。
做得好的话转化效率可以到10E8的。
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6楼2012-12-06 17:07:12
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hchen82

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2013-01-09 15:46:56
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