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青苹果QT

金虫 (小有名气)

[求助] LR反应

有没有做LR反应的呀?
为什么电击时会爆?!三个杯子同样的操作,为什么会有一个爆了
而且把爆了的那个同样的操作,长出来几个菌落
求解!
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hchen82

禁虫 (小有名气)

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-28 13:58:07
本帖内容被屏蔽

2楼2012-11-28 10:44:56
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hchen82 at 2012-11-28 10:44:56
三个杯子 都是转同样的样品么(这个真没必要)
离子浓度可能高了,样品不是很纯,DNA加多了,有时杯子老化……
重新长出来的几个菌落有可能阴性的,不过可以摇一下……(一般爆杯之后,就扔掉重做)

三个杯子不是同一个样品,是做两个样品,爆了一个,然后又重新组了哪一个。离子浓度高的意思是说杯子没有洗干净吗??三个杯子一起洗的,洗了四五遍。。。。质粒是稀释100倍之后加的,长出的菌PCR死阳性的。
关键是最近做了三次都会爆一个,师兄师姐说他们做了这么多次也就爆股一两次。。。。苦恼啊
3楼2012-11-28 12:51:58
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青苹果QT

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hchen82 at 2012-11-28 10:44:56
三个杯子 都是转同样的样品么(这个真没必要)
离子浓度可能高了,样品不是很纯,DNA加多了,有时杯子老化……
重新长出来的几个菌落有可能阴性的,不过可以摇一下……(一般爆杯之后,就扔掉重做)

三个杯子不是同一个样品,是做两个样品,爆了一个,然后又重新做了那一个。离子浓度高的意思是说杯子没有洗干净吗??三个杯子一起洗的,洗了四五遍。。。。质粒是稀释100倍之后加的,长出的菌PCR是阳性的。
关键是最近做了三次都会爆一个,师兄师姐说他们做了这么多次也就爆过一两次。。。。苦恼啊
4楼2012-11-28 12:53:13
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

通常采用化学法制备的感受态,可以用热击法转化。
电击感受态要求控制离子浓度,太麻烦了
5楼2012-12-06 17:05:00
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

方法可以参见Inoue法制备感受态,相应的转化方法在分子克隆第三版上都有。
做得好的话转化效率可以到10E8的。
6楼2012-12-06 17:07:12
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hchen82

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

7楼2013-01-09 15:46:56
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