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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何辨别引物之间是否能够形成引物二聚体
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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 如何辨别引物之间是否能够形成引物二聚体

以下是我用到的两对引物序列，大家帮忙看一下是不是很容易形成引物二聚体啊，为什么我试了各种方法，扩增出来的都只有二聚体没有目的条带，但是内参却扩增出来的很好，不知道什么原因呀
5′-AGCATCATGCCACCTACGTGA-3′
5′-CACCACCATTGAATTTCAGCG-3′


5′CGAGCTCGAACCTGTAATCAGCCATG 3′
5′GGGGTACCGCTGATATTCTTCCAGTTG 3′
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1楼 2012-11-09 16:21:13
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+3, ★有帮助 2012-11-12 08:10:10
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-11-12 14:35:33
自己看看引物3'端末端是否有互补序列，这样的话容易造成引物以引物为模板进行延伸，行成引物二聚体。
我觉得还是你的引物设计的不好，
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coasttocoast。
2楼2012-11-09 23:21:39
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tupac225 at 2012-11-09 23:21:39
自己看看引物3'端末端是否有互补序列，这样的话容易造成引物以引物为模板进行延伸，行成引物二聚体。
我觉得还是你的引物设计的不好，

可是我的引物是按照文献中用过的引物合成的呀，我就是不明白为什么人家论文里面能扩增出来，而我却做不出来呢。
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3楼2012-11-10 08:09:21
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dsm1026

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
别人文献里的模板跟你的模板是一样的吗？还有。你的引物内部之间可能会形成发夹结构。
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4楼2012-11-10 09:03:17
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dsm1026 at 2012-11-10 09:03:17
别人文献里的模板跟你的模板是一样的吗？还有。你的引物内部之间可能会形成发夹结构。

不是一样的，但是处理是相同的，感觉我的模板肯定有该基因的，不知道为何扩增不出来。
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5楼2012-11-12 08:12:41
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wcg129

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★有帮助 2012-11-12 14:44:40
本帖内容被屏蔽
6楼2012-11-12 10:21:08
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wcg129 at 2012-11-12 10:21:08
不排除无模板的可能，在这里纠结还不如直接找一个该基因或者合成一个该基因验证一下？...

我刚才又考虑了一下，可能是我的模板放的时间太长了，可能部分降解了，我想问一下该如何检测我的模板是否降解呢？
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7楼2012-11-12 11:10:08
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wcg129 at 2012-11-12 10:21:08
不排除无模板的可能，在这里纠结还不如直接找一个该基因或者合成一个该基因验证一下？...

我刚才又考虑了一下，可能是我的模板放的时间太长了，可能部分降解了，我想问一下该如何检测我的模板是否降解呢？
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8楼2012-11-12 11:10:34
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动力泉

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-11-12 14:44:56
将模板跑个电泳，拖尾严重的可能降讲解
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好好学习
9楼2012-11-12 12:58:06
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 动力泉 at 2012-11-12 12:58:06
将模板跑个电泳，拖尾严重的可能降讲解

好的，谢谢！
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10楼2012-11-12 14:43:56
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