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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 如何提高分离度？看图说话~~
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yuanhangboy

金虫 (正式写手)

从零开始

[求助] 如何提高分离度？看图说话~~

色谱条件：
流动相：甲醇：缓冲盐（硫酸铜1g,L-苯丙氨酸1.32g，β-CD 8g,加水至500ml，用NaOH调PH至3.5）=20:80
检测波长：295nm
柱温：40度

结果：看下图。

大家帮忙看一下，有两个物质分不开，如何提高分离度呢？

附图.jpg
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厚积薄发，方可游刃有余！
1楼 2012-11-07 16:52:48
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marktiger

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-11-07 20:58:49
yuanhangboy: 金币+1, ★★★很有帮助, 走梯度的话，估计不好调，这几个组分是异构体。 2012-11-08 08:58:15
走梯度会不会好一点？
或者微调一下pH？
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marktigerchen
2楼2012-11-07 17:04:45
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魏宝红cool

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
从头开始: 金币+1, 感谢参与 2012-11-07 20:58:57
前面还有成分要出峰吗？可以走一个梯度吧，如果没有其他成分，顺便缩短一下分析时间呗
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3楼2012-11-07 19:18:53
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kobechan

至尊木虫 (知名作家)

石鼓

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhychen2008: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-11-24 16:04:50
这种微调下流动相就可以了
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4楼2012-11-08 05:56:25
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mxx7456

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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niebiao2008: 金币+1, 感谢交流 2012-11-08 06:59:52
换根别的色谱柱试试呢 ，要不就稍微调试一下流动相的比例
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5楼2012-11-08 06:46:02
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chinaherbfans

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yuanhangboy: 金币+1, ★★★很有帮助, 非常感谢，但是微调比例的话，保留时间会增加很多。 2012-11-08 08:55:42
看流动相应该是异构体的分离，难度本身就比较大。
看图的话，虽然没达到基线分离，但未必分离度就不符合要求，这种程度的分离在很多情况下是可以接受的，楼主仔细参考下文献资料。
如再要提高分离度，不改变色谱系统的前体下，就是常规的一些微调
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6楼2012-11-08 08:21:26
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cepha

铁杆木虫 (著名写手)
★
zhychen2008: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-11-24 16:05:36
降低有机相比例或者调节Ph范围。降低流速。
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求索
7楼2012-11-08 09:33:37
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yuanhangboy

金虫 (正式写手)

从零开始
引用回帖:
7楼: Originally posted by cepha at 2012-11-08 09:33:37
降低有机相比例或者调节Ph范围。降低流速。

流速为0.5
有机相比例试过90:10
pH都微调过
这个条件是这个体系最好的
想不出还有什么更好的方法了？
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厚积薄发，方可游刃有余！
8楼2012-11-08 09:49:09
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gaoyuan06

铜虫 (小有名气)
★
zhychen2008: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-11-24 16:06:24
我以前做这种流动相的时候，增加硫酸铜的比例可改善峰形，不过好伤柱子啊，楼主试试？觉得六楼说得有道理，找到不必要非得1.5的理由，比挖空心思提高分离度有用
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9楼2012-11-08 12:31:47
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yumulin

金虫 (正式写手)
★
zhychen2008: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-11-24 16:07:42
首先一点，我们可以看到，这几个峰出峰时间是非常靠后的，所以峰展宽比较大；
所以还是有个梯度，一方面缩短分析的时间，另外一方面减小峰宽。还有不知道你使用的是什么柱子？
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10楼2012-11-08 13:01:22
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