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襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

[求助] 关于MTT的一些问题,有点多。。。

看论坛有很多相关经验,但是还是不太懂
1.DSMO药物溶解:假如我用DMSO溶解药物制成母液,那梯度稀释的时候我用培养基的话,岂不是每孔DMSO的量也跟着被稀释,那是不是每个药物梯度我都要设置不同含量的DMSO调零和包括不同含量的DMSO细胞悬液的对照组浓度?
2.有机溶剂稀释:假如我用有机溶剂进行稀释,比如说乙醇,是不是还要做一下百分之几的乙醇溶解药物对细胞的影响会小一些?那稀释的时候是用培养基稀释呢还是直接用乙醇稀释呢?我用水提的药物用有机溶剂稀释是否可行?
3.还有如果用培养基稀释的话,到底是用含血清还是不含血清的?
4.还有加药是加2微升还是10微升还是20微升这个问题,我理解的是不管加多少只要保证孔里药的浓度是你要的就行了吧?不知道我表达的对不对

[ Last edited by 襄阳蓉儿 on 2012-11-7 at 10:29 ]
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少壮不努力,长大pcr
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xhy3587

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DMSO的终浓度在0.1%以下可以不刻意平衡
5楼2012-11-09 11:30:47
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查看全部 6 个回答

襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

唉…没人…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
少壮不努力,长大pcr
2楼2012-11-08 23:18:24
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wy5346

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+5, 鼓励回答 常来啊 2012-11-09 10:12:29
襄阳蓉儿: 回帖置顶 2012-11-10 14:05:21
1.DSMO药物溶解的问题:用DMSO溶解药物制成母液,梯度稀释的时候不要用培养基,可以先用DMSO稀释成不同的药物梯度(如1000mM,500mM,100mM),最后再用培养基1000倍稀释,那么加入的药物浓度相当于是1000μM、500μM、100μM,这样可以保证每孔中加入的DMSO量固定,那么你所设置的对照组就用培养基和DMSO 1000:1稀释即可。
2.有机溶剂稀释:应该是要做一下百分之几的乙醇溶解药物对细胞的影响会小,一般1000:1不会有太大毒性,还得看你的染毒时间和你的药物的溶解性。
3.用培养基稀释的话,最好是不含血清的,因为我们看毒性最好是让细胞停止生长去看比较好。但是如果你看长期毒性,不加血清的话细胞状态会非常不好,里面长有东西,我们实验室是这样的,你可以试试,在你的染毒时间内不加血清如果不出问题,那最好是不要加血清。
4.原则上来讲是只要保证孔里药的浓度就可以,但是如果加的体积过大的话,如20μL,那么引入的DMSO或乙醇(药物的溶剂)就越多,要知道这些东西也是有毒性的,会使你的数据不漂亮。
4楼2012-11-09 09:44:27
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shijunyu0618

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上正解,DMSO不超过千分之一,就可以了。
6楼2012-11-09 14:55:54
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