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襄阳蓉儿

新虫 (小有名气)

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[求助] 关于MTT的一些问题，有点多。。。

看论坛有很多相关经验，但是还是不太懂
1.DSMO药物溶解：假如我用DMSO溶解药物制成母液，那梯度稀释的时候我用培养基的话，岂不是每孔DMSO的量也跟着被稀释，那是不是每个药物梯度我都要设置不同含量的DMSO调零和包括不同含量的DMSO细胞悬液的对照组浓度？
2.有机溶剂稀释：假如我用有机溶剂进行稀释，比如说乙醇，是不是还要做一下百分之几的乙醇溶解药物对细胞的影响会小一些？那稀释的时候是用培养基稀释呢还是直接用乙醇稀释呢？我用水提的药物用有机溶剂稀释是否可行？
3.还有如果用培养基稀释的话，到底是用含血清还是不含血清的？
4.还有加药是加2微升还是10微升还是20微升这个问题，我理解的是不管加多少只要保证孔里药的浓度是你要的就行了吧？不知道我表达的对不对

[ Last edited by 襄阳蓉儿 on 2012-11-7 at 10:29 ]

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少壮不努力，长大pcr

1楼 2012-11-07 10:12:41

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wy5346

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
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专业: 细胞生物学研究中的新方法

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+5, 鼓励回答常来啊 2012-11-09 10:12:29
襄阳蓉儿: 回帖置顶 2012-11-10 14:05:21

1.DSMO药物溶解的问题：用DMSO溶解药物制成母液，梯度稀释的时候不要用培养基，可以先用DMSO稀释成不同的药物梯度（如1000mM，500mM，100mM)，最后再用培养基1000倍稀释，那么加入的药物浓度相当于是1000μM、500μM、100μM，这样可以保证每孔中加入的DMSO量固定，那么你所设置的对照组就用培养基和DMSO 1000:1稀释即可。
2.有机溶剂稀释：应该是要做一下百分之几的乙醇溶解药物对细胞的影响会小，一般1000:1不会有太大毒性，还得看你的染毒时间和你的药物的溶解性。
3.用培养基稀释的话，最好是不含血清的，因为我们看毒性最好是让细胞停止生长去看比较好。但是如果你看长期毒性，不加血清的话细胞状态会非常不好，里面长有东西，我们实验室是这样的，你可以试试，在你的染毒时间内不加血清如果不出问题，那最好是不要加血清。
4.原则上来讲是只要保证孔里药的浓度就可以，但是如果加的体积过大的话，如20μL，那么引入的DMSO或乙醇（药物的溶剂）就越多，要知道这些东西也是有毒性的，会使你的数据不漂亮。